Новий колориметричний метод для визначення Скополаміну бутил броміду, що грунтується на інгібуванні активності холін естерази.

Abstract

Опрацьована методика ензимо-кінетичного визначення скополаміну бутилброміду (СББ) (син. бутилскополамін, бутилгіосцин), в основі якої покладена здатність гіосцину гальмувати реакцію гідролітичного розкладення ацетилхоліну в присутності фермента холінестерази. Вміст гіосцину запропоновано визначати за ступенем інгібування ферментної реакції, котрий оцінюють за залишком непрореагованого ацетилхоліну: визначення ацетилхоліну у ферментній реакції здійснюють кінетичним методом тангенсів за реакцією окиснення індикаторної речовини n-фенетидину утвореною в попередній реакції пергідролізу (з надлишком гідроген пероксиду) надацетатною кислотою. Швидкість індикаторної реакції визначають фотометричним методом за світлопоглинанням утворюваного азоксифенетолу (λmax=350 нм). При визначенні СББ в межах концентрацій 1…6 мкг/мл RSD≤7%. Показана можливість здійснення кількісного визначення вмісту скополаміну бутилброміду в субстанції та пігулках Спазмобрю 10 мг, RSD ±1,72% (δ=+0,41%) та ±1,65% (δ=+0,5%) відповідно.

Проработана методика энзимно-кинетического определения скополамина бутилбромида (СББ) (син. Бутилскополамин, бутилгиосцин), в основе которой лежит способность гиосцина тормозить реакцию гидролитического разложения ацетилхолина в присутствии фермента холинэстеразы. Содержание гиосцина предложено определять по степени ингибирования ферментной реакции, который оценивают по остатку непрореагировавшего ацетилхолина: определение ацетилхолина в ферментной реакции осуществляют кинетическим методом тангенсов за реакцией окисления индикаторного вещества n-фенетидину образованной в предыдущий реакции пергидролизу (с избытком водород пероксида) надацетатною кислотой. Скорость индикаторной реакции определяют фотометрическим методом с используя светопоглощения создаваемого азоксифенетолом (λmax = 350 нм). При определении СББ в пределах концентраций 1 ... 6 мкг / мл RSD≤7%. Показана возможность осуществления количественного определения содержания скополамина бутилбромида в субстанции и таблетках Спазмобрю 10 мг, RSD ± 1,72% (δ = + 0,41%) и ± 1,65% (δ = + 0,5%) соответственно.

A new method for enzyme-kinetic determination of scopolamine butylbromide (SBB), based on the SBB ability to inhibit the reaction of hydrolytic acetylcholine decay over cholinesterase enzyme is elaborated. Scopolamine butylbromide content is determined by the degree of enzyme reaction inhibition, which is measured using unreacted acetylcholine in enzyme reaction: determination of acetylcholine is carried out by kinetic tangent method with p-phenetidine oxidizing reaction, formed in the previous perhydrolysis reaction (with excess hydrogen peroxide) by peracetic acid. Indicator reaction rate is determined by the photometric method by the increase of absorbance formed azoxyphenetole (λmax=350 nm). The proposed method was applied successfully to analyze scopolamine butylbromide in tablets dosage form. No interference was observed from common pharmaceutical excipients. In the optimum conditions, the calibration curve is linier over the range 1 ... 6 μmol / L (r=0,996). The relative standard deviation was ± 7.4% (n=5) for 1.15 μmol / L and ± 1.95% (n=5) for 5.75 μmol / L (δ=-1.22 % and 0.03% respectively). The limit of quantitation (for the reaction inhibition grade 20%) 2 ∙ 10-6 mol / L(n=5). For seven determinations of active substance content in scopolamine buthylbromide substance drug was found to be 99.62%, RSD=1.72% (δ = + 0.41%; compared with HPLC method). A recovery of scopolamine buthylbromide in “Spasmobru” tablets 10 mg is 100.51%, RSD=1.65% (δ = + 0.5%).