Determination of cytochrome c by a chemiluminescence method with luminol in biological object

Abstract

A sensitive, rapid, and simple chemiluminescence (CL) procedure was proposed for the assay of Cytochrome c (Cyt c). The determination of Cytochrome c was achieved by monitoring the chemiluminescence emission from the luminol-hydrogen peroxide reaction in the presence of Cyt c. Under optimum conditions, the linearity of the results was examined by measuring a series of standard solutions. The maximum CL intensity was found to be proportional to Cyt c concentration, and the response to the concentration was linear over the range from 0.18 to 1.8 µg ml−1 with the detection limit of 0.06 µg ml−1 (3σ, n=5). The regression equation was, ICL = (0.59±0.03)•C, r2=0.9986; LOQ (10S)=0.18 µg mL–1. The recoveries for the different concentration levels varied from 98.0% to 109.0% with a relative standard deviation of less than 3.0%. A result determination of the concentration of Cyt c in serum of mice in norm (n=5; P=0.95) was 5.95±0.2 µmol•L–1 (RSD=2.5%).

Для кількісного визначення Цитохрому с (Cyt c) була запропонована чутлива, швидка та проста хемілюмінес- центна (CL) методика. Визначення Цитохрому с було досягнуто за допомогою моніторингу хемілюмінесцентного віпромінювання в реакції гідроген перекису з люмінолом в присутності Cyt c. За оптимальних умова лінійність кон- центраційної залежності була досліджена шляхом вимірювання серії стандартних розчинів. Було виявлено, що мак- симальна інтенсивність CL пропорційна концентрації Cyt c, а відгук залишався лінійним в інтервалі концентрацій від 0,18 до 1,8 мкг мл-1 з межею виявлення 0,06 мкг мл-1 (3S, n = 5). Рівняння регресії мало вигляд ICL = (0,59 ± 0,03) × C, r2 = 0,9986; LOQ (10S) = 0,18 мкг мл-1. Знайдене значення для різних рівнів концентрації коливалося від 98,0% до 109,0% при RSD < 3,0%. Результат визначення концентрації Cyt c у сироватці крові мишей в нормі (n = 5; P = 0,95) становив 5,95±0,2 мкмоль × L– 1 (RSD = 2,5%).

Чувствительная, быстрая и простая хемилюминесцентная (ХЛ) методика была предложена для количественного определения Цитохрома с (Cyt c). Определение Cyt c было достигнуто путем мониторинга эмиссии хемилюминес- ценции в реакции перекиси водорода с люминолом в присутствии Cyt с. В оптимальных условиях линейность ре- зультатов была исследована путем измерения серии стандартных растворов. Было обнаружено, что максимальная интенсивность ХЛ была пропорциональна концентрации Cyt c, и зависимость оставалась линейной в диапазоне от 0,18 до 1,8 мкг мл-1 с пределом обнаружения 0,06 мкг мл-1 (3S, n = 5). Уравнение регрессии имело вид: ICL = (0,59 ± 0,03) × C, r2 = 0,9986; LOQ (10S) = 0,18 мкг мл–1. Величина найденного среднего значения для разных уровней концентрации варьировались от 98,0% до 109,0% с относительным стандартным отклонением менее 3,0%. Резуль- тат определения концентрации Cyt c в сыворотке мышей в норме (n = 5; P = 0,95) составил 5,95±0.2 мкмоль L– 1 (RSD = 2,5%).