Лабораторна токсикологічна діагностика отруєнь флуоксетином

Abstract

Провідне значення для встановлення причини отруєнь антидепресантами мають результати лабораторної діагностики, отримані при проведенні токсикологічного дослідження біологічних рідин людини на присутність у них лікарських речовин. Метою дослідження була розробка біоаналітичного методу визначення антидепресанту флуоксетину в крові та сечі на основі високоефективної рідинної хроматографії з мультихвильовим УФ-спектрофотометричним детектуванням, придатного для лабораторної токсикологічної діагностики отруєнь антидепресантами. Матеріали та методи. Досліджували модельні проби крові та сечі, які містили досліджуваний антидепресант. Екстракцію препарату з біологічних рідин проводили хлороформом із лужного середовища при рН 8-9 у присутності висолювача амонію сульфату. Форменні елементи крові осаджували 10 % розчином кислоти трихлороацетатної. Біологічні домішки видаляли екстракцією діетиловим етером з кислого середовища та методом ТШХ. Хроматографічний аналіз проводили на мікроколоночному хроматографі з мультихвильовим УФ-спектрофотометричним детектором на колонці з оберненою фазою С18. Результати. Час утримування флуоксетину в екстрактах із крові та сечі становив (23,35 ± 0,03) хв. Кількісне визначення проводили при λmax 260 нм за градуювальним графіком залежності площі піку від концентрації (мкг/мл) y = (9,2∙10-5 ± 1∙10-6)x. За допомогою розробленої методики пробопідготовки з крові виділено (58 ± 4) % флуоксетину, з сечі – (72 ± 4) % препарату. Висновки. Розроблені методики визначення флуоксетину в крові та сечі методом оберненофазової ВЕРХ з мультихвильовим УФД після рідинно-рідинної екстракції на стадії пробопідготовки дозволили виявити та визначити очікувані токсичні та летальні концентрації вказаного антидепресанту в біологічних рідинах і, таким чином, є придатними для цілей клінічної та судової токсикології.

The results of laboratory diagnosis obtained during the toxicological study of human biological fluids for the presence of drugs are of key importance for determining the cause of the antidepressant poisoning. Aim. To develop the bioanalytical method for determining the antidepressant fluoxetine in the blood and urine based on the high-performance liquid chromatography with a multiwave UV spectrophotometric detection, which is suitable for laboratory toxicological diagnosis of the antidepressant poisoning. Materials and methods. The model blood and urine samples spiked with the antidepressant studied were analyzed. The extraction of the drug from biological fluids was performed with chloroform from the alkaline medium at pH of 8-9 in the presence of ammonium sulfate as a salting-out agent. The formed elements of blood were precipitated with 10 % trichloroacetic acid. The biological admixtures were removed by extraction with diethyl ether from the acidic medium and the TLC method. The chromatographic analysis was performed on a microcolumn chromatograph with a multiwave UV spectrophotometric detector on a reversed-phase C18 column. Results. The retention time of fluoxetine in extracts from the blood and urine was 23.35 ± 0.03 min. The quantitative determination was performed at λmax 260 nm by the calibration curve of the dependence of the concentration on the peak area (μg/ml) y = (9.2∙10-5 ± 1∙10-6)x. Using the sample preparation method developed 58±4 % of fluoxetine was isolated from the blood, (72 ± 4) % of the drug from the urine. Conclusions. The methods developed for the determination of fluoxetine in the blood and urine by the reversed-phase HPLC with a multiwave UVD after the liquid-liquid extraction at the stage of sample preparation have allowed to identify and determine the expected toxic and lethal concentrations of this antidepressant in biological fluids, and therefore, are suitable for the purpose of clinical and forensic toxicology

Ведущее значение для установления причины отравлений антидепрессантами имеют результаты лабораторной диагностики, полученные при проведении токсикологического исследования биологических жидкостей человека на присутствие в них лекарственных веществ. Целью исследования была разработка биоаналитического метода определения антидепрессанта флуоксетина в крови и моче на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии с мультиволновым УФ-спектро- фотометрическим детектированием, пригодного для лабораторной токсикологической диагностики отравлений антидепрессантами. Материалы и методы. Исследовали модельные пробы крови и мочи, содержащие исследуемый антидепрессант. Экстракцию препарата из биологических жидкостей проводили хлороформом из щелочной среды при рН 8-9. Форменные элементы крови осаждали 10 % раствором кислоты трихлорацетатной. Очистку от биологических примесей проводили экстракцией диэтиловым эфиром из кислой среды и методом ТСХ. Хроматографический анализ проводили на микроколоночном хроматографе с мультиволновым УФ-спектрофотометрическим детектором на колонке с обращенной фазой С18. Результаты. Время удерживания флуоксетина в экстрактах из крови и мочи составляло (23,35 ± 0,03) мин. Количественное определение проводили при λmax 260 нм по градуировочному графику зависимости площади пика от концентрации (мкг/мл) в соответствии с уравнением y = (9,2∙10-5 ± 1∙10-6)x. С помощью разработанной методики из крови было выделено (58 ± 4) % флуоксетина, из мочи – (72 ± 4) % препарата. Выводы. Разработанные методики определения флуоксетина в крови и моче методом обратнофазной ВЭЖХ с мультиволновым УФД после жидкостно-жидкостной экстракции на стадии пробоподготовки позволили обнаружить и определить предполагаемые токсические и летальные концентрации указанного антидепрессанта в биологических жидкостях и, таким образом, пригодны для целей клинической и судебной токсикологии.