Аналітичне забезпечення фармацевтичної розробки, оптимізація методів контролю якості та стандартизація м’яких лікарських засобів з кетопрофеном

Abstract

Розроблено методики визначення кетопрофену, декскетопрофену та продуктів їх розкладання методом ВЕРХ, а також метилсаліцилату методом ВЕРХ, левоментолу, етанолу та ДМСО методом ГХ. Коректність методик доведена за результатами валідації. Методом ВЕРХ досліджено вплив стресових факторів на стабільність кетопрофену й декскетопрофену, а також досліджено утворення естерів кетопрофену в розчинах з гідрофільними розчинниками, в молекулах яких є гідроксильна(і) група(и), та з левоментолом. Розроблено методику визначення естерів кетопрофену з макроголом 400 або левоментолом методом ВЕРХ в режимі градієнтного елюювання. Коректність методики доведена за результатами валідації. Обґрунтовано підхід до ідентифікації та кількісного визначення естерів кетопрофену. Обґрунтовано підхід до оцінки однорідності розподілу речовин в МЛЗ. Здійснено аналітичний супровід фармацевтичної розробки і стандартизацію препарату НОБІ ГЕЛЬ® гель 2,5 %, що зареєстрований МОЗ України (UA/15144/01/01) і впроваджений у виробництво, препаратів Фламадекс® гель 2,5 % і Зумба гель, що пройшли клінічні випробування і знаходяться на етапі реєстрації, та препарату Сустагард® Плюс крем-гель. На препарати розроблені реєстраційні документи.

Диссертация посвящена разработке и валидации методик идентификации и количественного определения кетопрофена, декскетопрофена и продуктов их разложения, а также методик анализа некоторых других лекарственных веществ и усилителей проникновения (этанола и ДМСО), аналитическому обеспечению фармацевтической разработки монопрепаратов и комбинированных препаратов с этими веществами в форме гелей и крем-гелей, а также стандартизации препаратов. Разработаны методики: определения кетопрофена в растворах методом абсорбционной спектрофотометрии в УФ и видимой областях; идентификации и количественного определения в гелях кетопрофена и декскетопрофена и сопутствующих примесей методом ВЭЖХ, позволяющие определять их в одинаковых хроматографических условиях или в одинаковых условиях и в одном испытуемом растворе; определения в геле R-(–)-энантиомера кетопрофена методом ВЭЖХ; идентификации и количественного определения кетопрофена и метилсалицилата методом ВЭЖХ, а также левоментола методом ГХ в комбинированном препарате в форме крем-геля; определения этанола (96 %), а также этанола и ДМСО в гелях методом ГХ. По результатам валидации показана корректность разработанных методик. Исследовано влияние стрессовых факторов на стабильность кетопрофена и декскетопрофена в растворах. Показано, что эти вещества стабильны в кислой и щелочной средах, при повышенной температуре 60 °С и под влиянием перекиси водорода. Критичным для их стабильности является облучение растворов УФ светом, под действием которого образуются неидентифицированные примеси (НИП) и кетопрофена примесь А. Профиль примесей, образующихся при УФ облучении, одинаков для кетопрофена и декскетопрофена, а также при использовании смешанных растворителей с рН 4,0 и 2,5, однако разложение этих веществ происходит более интенсивно в растворителе с рН = 4,0. НИП образуются также под влиянием дневного света, от которого растворы следует защищать во время анализа. Кетопрофена примесь С не является продуктом разложения. Установлено, что кетопрофен образует в растворах сложные эфиры с этанолом, пропиленгликолем, глицерином, диэтиленгликоля моноэтиловым эфиром и макроголом 400, которые имеют в молекулах гидроксильные группы. Содержание сложных эфиров увеличивается со снижением рН растворов от 7,0 до 3,0, зависит от природы растворителей и количества гидроксильных групп в их молекулах. В растворах с увеличением содержания сложных эфиров уменьшается содержание кетопрофена. Длительное хранение растворов при повышенной температуре способствует образованию как сложных эфиров, так и кетопрофена примеси А, на содержание которой растворители и рН не влияют. Кетопрофен не взаимодействует с N-метилпирролидоном и ДМСО, в молекулах которых отсутствуют гидроксильные группы. Обоснованы подходы к идентификации сложных эфиров кетопрофена с растворителями или левоментолом методом ВЭЖХ с использованием масс-детектора и диодно-матричного детектора, а также к их количественному определению методом ВЭЖХ с использованием стандартного образца (СО) кетопрофена. Предложено определять содержание сложных эфиров с учётом коэффициента пересчёта, рассчитанного по соотношению факторов отклика или удельных показателей поглощения растворов кетопрофена и сложного эфира, или молекулярных масс сложного эфира и кетопрофена. Содержание сложного эфира можно определять также по содержанию в нём кетопрофена без коэффициента пересчёта, что удобно для подведения баланса масс. Разработана новая методика определения сложных эфиров кетопрофена с макроголом 400 или левоментолом в режиме градиентного элюирования с использованием СО кетопрофена, корректность которой доказана при её валидации. В крем-гелях, содержащих 2,5 % кетопрофена, 10 % метилсалицилата (МС) и 5 % левоментола, исследовано образование продуктов разложения при рН 5,5 и 6,8, обусловливающих разную локализацию кетопрофена в дисперсной фазе и водной среде эмульсии типа м/в. Показано, что скорость образования и содержание сложных эфиров кетопрофена оказываются меньше при рН = 6,8 и введении кетопрофена как соли трометамола в водную среду крем-геля. Однако при рН = 6,8 образуются три продукта разложения МС, содержание которых возрастает при хранении. Чтобы избежать разложения МС, кетопрофен следует растворять в дисперсной фазе и нормировать рН ~5,5. Следует использовать растворители без гидроксильных групп, что ограничит профиль примесей сложными эфирами энантиомеров кетопрофена с левоментолом. Предложено определение термина «однородность мягких лекарственных средств (МЛС)». Обоснован подход к оценке однородности распределения лекарственных и вспомогательных веществ в МЛС, основанный на сходимости результатов их количественного определения в серии отобранных проб. Для характеристики сходимости использован относительный доверительный интервал, который должен быть меньше максимально допустимой неопределённости результатов анализа, являющейся критерием приемлемости. При оценке однородности полезно сравнить полученные результаты со сходимостью методики. Дополнительным условием должно быть соответствие количественного содержания анализируемого вещества в каждой пробе нормам спецификации. Определена однородность и качество МЛС, в которых исследуемые вещества находились в виде истинных растворов, дисперсных фаз эмульсий и суспензий. Осуществлено аналитическое сопровождение фармацевтической разработки и стандартизация: препарата НОБИ ГЕЛЬ® гель 2,5 %, содержащего 2,5 % кетопрофена, который зарегистрирован МЗ Украины (UA/15144/01/01) и внедрён в промышленное производство; препаратов Фламадекс® гель 2,5 %, содержащего 2,5 % декскетопрофена, и Зумба гель, содержащего 2,5 % кетопрофена, 10 % метилсалицилата и 5,0 % левоментола, которые прошли клинические испытания и находятся на этапе регистрации, препарата Сустагард® Плюс крем-гель, содержащего 2,0 % кетопрофена и 5,0 % глюкозамина гидрохлорида. На препараты разработаны регистрационные документы.

Analytical procedures for identification and assay of ketoprofen, dexketoprofen and products of their decomposition by HPLC as well as methylsalicylate by HPLC, levomentol, ethanol and DMSO by GC were developed. The correctness of the procedures was proved by the validation results. The effect of stress factors on the stability of ketoprofen and dexketoprofen was investigated by HPLC, as well as the formation of ketoprofen esters in solutions with hydrophilic solvents, whose molecules contain hydroxyl group(s), and with levomenthol was studied. The procedures for identification and assay of ketoprofen esters with macrogol 400 and levomentod by HPLC with gradient elution were developed. The correctness of the procedures was proved by the validation results. The approach to the identification and assay of ketoprofen esters was substantiated. The approach to estimation of homogeneity of substances distribution in semi-solid preparations was substantiated. Analytical support of pharmaceutical development and standardization of NOBI GEL® gel 2,5 % (Ministry of Health of Ukraine (UA/15144/01/01) registered this product, its manufacture was started), Flamadex® gel 2,5 % and Zumba gel (the clinical trials of these products were successful, they are in the registration phase) as well as of Sustagard® Plus cream-gel. Registration documents were developed for these medicinal products.