Пошук та фармакологічне вивчення рослинних гепатопротекторів для корекції лікарських уражень печінки (експериментальне дослідження)

Abstract

Дисертація присвячена експериментальному обґрунтуванню доцільності створення нових вітчизняних гепатопротекторів на основі рослинних екстрактів для корекції токсичних ефектів антибактеріальної терапії. За результатами скринінгового дослідження на моделі ТХМ гепатиту, були відібрані 5 екстрактів (ЕКПВ, ЕКПС 30%, ЕКПС 50%, ЕЛЗВ і ЕЛЗС 50%) в умовно-ефективній дозі 5 мг/кг. Дослідження їх безпеки за допомогою вивчення гострої токсичності показало, що згідно із загальноприйнятою токсикологічною класифікацією речовин вони при внутрішньошлунковому введенні білим мишам і статевонезрілим щурам належать до V класу токсичності – практично нешкідливих речовин (ЛД50>5000 мг/кг). З використанням тестсистеми Drosophila melanogaster Meig. в тесті обліку рецесивних, зчеплених зі статтю летальних мутацій за методом Меллер-5 встановлено, що екстракт ласкавця золотистого, екстрагований 50 % спиртом, у напівлетальній дозі і продукти його метаболізму не індукують рецесивні, зчеплені зі статтю летальні мутації. Доведено, що екстракти ласкавця золотистого і кураю пагорбкового, отримані водним та 50 % спиртовим витягами, у дозі 5 мг/кг виявляють виражені антиокиснювальні, антиоксидантні, мембранопротекторні, протизапальні, жовчоутворювальні властивості та показана доцільність подальшого їх застосування у комбінації з антимікробним препаратом ко-тримоксазол. Встановлено, що додавання до рецептури препарату котримоксазол екстракту ласкавця золотистого, екстрагованого 50 % спиртом, є найбільш перспективним і не впливає на його вихідні антимікробні властивості.

Диссертация посвящена экспериментальному обоснованию целесообразности создания новых отечественных гепатопротекторов на основе растительных экстрактов с целью коррекции токсических эффектов антибактериальной терапии. Проведены комплексные исследования по изучению фармакологических свойств 16 оригинальных сухих экстрактов володушки золотистой, солянки холмовой, дымянки Шлейхера и артишока посевного, полученных водным и спиртовым экстрагированием, в системах in vitro и in vivo. В исследованиях in vitro показано, что все изученные растительные экстракты способны блокировать как спонтанные, так и аскорбатиндуцированные процессы ПОЛ, что свидетельствует об их антиокислительной активности. Наиболее выражено это свойство у экстрактов володушки золотистой и солянки холмовой. В исследованиях in vivo на модели острого ТХМ гепатита установлено, что экстракты володушки золотистой и солянки холмовой в дозе 5 мг/кг проявляют выраженное антиоксидантное действие. По результатам скринингового исследования на модели ТХМ гепатита, были отобраны 5 наиболее активных экстрактов в условно-эффективной дозе 5 мг/кг, что обосновывает перспективность дальнейшего углубленного изучения их фармакологических свойств и безопасности с целью создания нового отечественного гепатопротектора. Изучение острой токсичности показало, что экстракты-лидеры при внутрижелудочном введении белым мышам и неполовозрелым белым крысам относятся к V классу токсичности – практически безвредным веществам (ЛД50>5000 мг/кг). Изучение показателя общей продуктивности дрозофилы в условиях влияния экстрактов володушки золотистой, экстрагированных водой, 50 % и 70 % спиртом, свидетельствует о том, что они характеризуются высокой биологической активностью. Установлено, что эффекты влияния экстрактов володушки золотистой могут существенно изменяться в зависимости от типа экстракции и концентрации действующих веществ. Культивирование дрозофилы в среде с экстрактом володушки золотистой, экстрагированного 50% спиртом в концентрациях 10-3 мг/мл, 10-2 мг/мл, 10-1 мг/мл, 1 мг/мл, 10 мг/мл, не оказывало токсического эффекта, а в концентрациях 10-3 мг/мл і 10-1 мг/мл повышало в сравнении с контролем общую продуктивность дрозофил на 23,67% (Р<0,05) і 59,22% (Р<0,05) соответственно. При изучении мутагенного действия с использованием тест-системы Drosophila melanogaster Meig. установлено, что экстракт володушки золотистой, экстрагированный 50% спиртом, в полулетальной дозе (250 мг/мл) и продукты его метаболизма не индуцируют рецессивные, сцепленные с полом летальные мутации. Экспериментально доказано, что экстракты володушки золотистой и солянки холмовой, полученные водным и 50 % спиртовым экстрагированием, в дозе 5 мг/кг имеют выраженные антиокислительные, антиоксидантные, мембранопротекторные, противовоспалительные, желчеобразующие свойства и показана целесообразность дальнейшего их применения в комбинации с антимикробным препаратом котримоксазол. На модели токсического медикаментозного гепатита, вызванного тетрациклином, доказано гепатопротекторное действие экстракта володушки золотистой, экстрагированного 50 % спиртом, в дозе 5 мг/кг. Совместное применение ЕКПС 50% или ЕЛЗС 50% в дозе 5 мг/кг с антимикробным препаратом котримоксазол в дозе 0,7 мг/кг способствовало поддержанию показателей сыворотки крови (АЛТ, АСТ, ЛФ, ТГ, холестерина, мочевины, глюкозы, билирубина, СМ) и гомогената печени (ТБК-Р, ВГ, каталазы, гликогена, Кred / ox) у неполовозрелых крыс в пределах нормы. Гепатопротекторное действие экстрактов володушки золотистой и солянки холмовой, полученных спиртовым экстрагированием в дозе 5 мг/кг, подтверждается исследованиями морфоструктуры печени, в которых установлено снижение выраженности апоптоза гепатоцитов. Экстракт володушки золотистой, экстрагированный 50% спиртом, имеет преимущество перед кверцетином и не уступает силибору. Растительные экстракты снижали апоптоз в клетках почек, поджелудочной железы неполовозрелых крыс и смягчали выраженность стандартных признаков иммунного ответа на антигенную стимуляцию ко-тримоксазолом. Совместное применение ко-тримоксазола с экстрактами володушки золотистой, экстрагированных 50% спиртом, является перспективным и не влияет на его выходные антимикробные свойства. По результатам работы целесообразно рекомендовать применение комбинации антимикробного препарата ко-тримоксазол и экстрактов володушки золотистой с целью коррекции его токсических свойств в процессе лечения инфекционных заболеваний у взрослых и детей.

Thesis is devoted to experimental confirmation of the creation of new domestic hepatoprotectors based on plant extracts for correction of toxic effects of antibiotic therapy. As a result of screening research on CTC hepatitis model were selected 5 extracts-leaders at a dose of 5 mg/kg. Research of leading-extracts safety using acute toxicity study revealed, that according to conventional toxicological classification of substances at intra-gastric administration to mice and immature rats are belonging to class V of toxicity – to almost harmless substances (LD50>5000 mg/kg). Using the test-system Drosophila melanogaster Meig. In the test of calculation of recessive, sex-linked lethal mutations by the method of Meller-5 was revealed that the extract of Bupleúrum auréum 50%, in the half-lethal dose and products of its metabolism does not induce recessive, sex-linked lethal mutations. It is evidenced, that extracts of Bupleúrum auréum and Salsola Collina L., received as a water and 50% alcohol extracts, at a dose of 5 mg/kg have shown antioxidant, membrane protective, antiinflammatory, bile producing properties and revealed expediency of their further use in combination with antimicrobial drug co-trimoxazole. It was shown that the addition of extracts of Bupleúrum auréum to the co-trimoxazole is the most promising and does not significantly affect its initial antimicrobial properties.