Application Enzymatic Method for Analysis Vaginal Tabletas “Fluomizin”

Abstract

Мета: Опрацювання нового ензимного кінетико-фотометричного методу аналізу деквалінію хлориду, який грунтуэться на використанні реакції гідролізу ацетилхоліну та використовується для визначення кількісного вмісту декваліній хлориду в вагінальних таблетках «Флуомізин» № 6. Матеріали та метод: кількість деквалінію хлориду (DCh) визначали за ступенем інгібування ферментативної реакції, який оцінювали за залишковим не прореагуваного субстрату - ацетилхоліну. Визначення залишкової кількості ацетилхоліну в реакційній суміші проводили кінетики-фотометричним методом з використанням індикаторної реакції окислення п-фенетидину пероцтової кислотою, що утворюється в допоміжної реакції пергідролізу після додавання надлишку гідрогену перексиду в реакційну суміш. Результати: Визначено оптимальні умови аналізу: pH 8,35, вивчено вплив природи буферного розчину, підібрані оптимальні концентрації ацетилхоліну (0,05 мг / мл), холінестерази (0,4 мг / мл), гідрогену пероксиду (10,0%), п -фенетедину (1%) та досліджено оптимальний час інкубації (10 хв). Висновки: Розроблено методику визначення вмісту деквалінію хлориду в вагінальних таблетках «Флуомізин» №6. Визначено кінетичні параметри Km (постійна Міхаеліса - Ментен) і Vmax (максимальна швидкість).

Введение: Разработка нового ферменого кинетико-фотометрического метода анализа деквалиния хлорида, который основан на использовании ферментативного гидролиза ацетилхолина для определения количества деквалиния хлорида в вагинальных таблетках «Флуомизин» № 6. Метод: количество деквалиния хлорида (DCh) определяли по степени ингибирования ферментативной реакции, которую оценивали по остаточному непрореагировавшему субстрату - ацетилхолину. Определение остаточного количества ацетилхолина в реакционной смеси проводили кинетико-фотометрическим методом с использованием индикаторной реакции окисления п-фенетидина перуксусной кислотой, образующейся при вспомогательной реакции пергидролиза с добавлением избытка перекиси водорода в реакционную смесь. Результаты: Определены оптимальные условия: выбран pH 8,35, изучено влияние природы буферного раствора, подобраны концентрации ацетилхолина (0,05 мг / мл), холинэстеразы (0,4 мг / мл), перекиси водорода (10,0%), п-фенетедина (1%) и время инкубации (10 мин). Выводы: Разработана методика определения содержания деквалиния хлорида в вагинальных таблетках «Флуомизин» №6. Определены кинетические параметры Km (постоянная Михаэлиса – Ментен) и Vmax (максимальная скорость).

Introduction: Development of a new enzymatic kinetic-photometric method for analysis of Dequalinium chloride, based on the use of enzymatic hydrolysis of acetylcholine, for determine the amount of Dequalinium chloride in the vaginal tablets “Fluomizin” No 6. Method: The amount of Dequalinium chloride (DCh) was determined by the degree of inhibition of the enzymatic reaction, which was evaluated by the residual unreacted substrate - acetylcholine. Determination of the residual amount of acetylcholine in the reaction mixture was performed by a kinetic-photometric method using an indicator oxidation reaction of p-phenetidine with peracetic acid, which is formed during the auxiliary reaction of perhydrolysis with addition of excess hydrogen peroxide in the reaction mixture over a period of time. Results: Optimal conditions were determined: pH 8.35 was selected, influence of nature of buffer solution, concentration of acetylcholine (0.05 mg / ml), cholinesterase (0.4 mg / ml), hydrogen peroxide (10,0%) and p-phenethedine (1 %), the incubation time (10 min). Conclusions: The procedure for determination of Dequalinium chloride content in the vaginal tablets “Fluomizin”No 6 was developed. The kinetic parameters Km (Michaelis–Menten constant) and Vmax (maximal velocity) were determined.