Determination of сlemastine by HPLC method in blood

Abstract

Метою дослідження є розробка алгоритму спрямованого аналізу клемастину в біологічних екстрактах крові за допомогою уніфікованого методу дослідження ВЕРХ. Матеріали і методи. Екстракцію клемастину проводили хлороформом при рН 9,0. Екстракти очищували від домішок комбінацією ТШХ та екстракцією гексаном. Очистка ТШХ та ідентифікація клемастину проводились в оптимальних умовах: система органічних розчинників - метанол - 25% розчин амонію гідроксиду (100: 1,5) та хроматографічні пластинки - Sorbfil PTLC-AF-A, Rf клемастину = 0,60±0,03. Для виявлення клемастину використовували найбільш чутливі реагенти - УФ-світло (λ = 254 нм) та реагент Драгендорфа у модифікації Муньє. Висновки. Клемастин екстрагували хлороформом при рН 9,0 з крові. Очистку екстрактів від співекстрактивних сполук проводили шляхом комбінування ТШХ та екстракції гексаном. Встановлено, що при виділенні клемастину з крові за розробленими методами можна визначити 36,05 - 39,55% речовини ( = ± 4,63%, RSD = 1,67%). Метод очистки ТШХ та ідентифікації клемастину в біогенних екстрактах апробовано в оптимальних умовах: система органічних розчинників - метанол - 25% розчин амонію гідроксиду (100:1,5) при застосуванні реагентів - УФ-світла та реагента Драгендорфа у модифікації Муньє, Rf клемастину = 0,60 ± 0,03 (Sorbfil PTLC-AF-A). Уніфікований метод ВЕРХ для ідентифікації та кількісної оцінки клемастину був опрацьований у біогенних екстрактах крові згідно розробленого алгоритму спрямованого аналізу. Встановлено, що клемастин можна ідентифікувати за часом утримування - 25,997 - 26,011 хв; об'ємом утримування 2599,7 - 2601,1 мкл; спектральними співвідношеннями - 0,741; 0,536; 0,096; 0,023; 0,027; 0,005; 0,003. Вміст клемастину визначали за рівнянням S = 0,15 · 10-3 С + 0,14 · 10-3; коефіцієнт кореляції дорівнював 0,9998.

Целью исследования является разработка алгоритма направленного анализа клемастина в биологических экстрактах крови с помощью унифицированного метода исследования ВЭЖХ. Материалы и методы. Экстракцию клемастина проводили хлороформом при рН 9,0. Экстракты очищали от примесей комбинацией ТСХ и экстракцией гексаном. Очистка ТСХ и идентификация клемастина проводились в оптимальных условиях: система органических растворителей - метанол - 25% раствор аммония гидроксида (100: 1,5) и хроматографические пластинки - Sorbfil PTLC-AF-A, Rf клемастина = 0,60 ± 0,03. Для обнаружения клемастина использовали наиболее чувствительные реагенты - УФ-свет (λ = 254 нм) и реагент Драгендорфа в модификации Мунье. Выводы. Клемастин экстрагировали хлороформом при рН 9,0 из крови. Очистку экстрактов от соэкстрактивних веществ проводили путем комбинирования ТСХ и экстракции гексаном. Установлено, что при выделении клемастина из крови по разработанным методикам можно определить 36,05 - 39,55% вещества ( = ± 4,63%, RSD = 1,67%). Метод очистки ТСХ и идентификации клемастина в биогенных экстрактах апробирован в оптимальных условиях: система органических растворителей - метанол - 25% раствор аммония гидроксида (100: 1,5), применение реагентов - УФ-света и реагента Драгендорфа в модификации Мунье, Rf клемастина = 0,60 ± 0,03 (Sorbfil PTLC-AF-A). Унифицированный метод ВЭЖХ для идентификации и количественной оценки клемастина был апробирован в биогенных экстрактах крови согласно разработанного алгоритма направленного анализа. Установлено, что клемастин можно идентифицировать по времени удерживания - 25,997 - 26,011 мин; объему удерживания 2599,7 - 2601,1 мкл; спектральным соотношениям - 0,741; 0,536; 0,096; 0,023; 0,027; 0,005; 0,003. Содержание клемастина определяли по уравнению S = 0,15 · 10-3 С + 0,14 · 10-3, коэффициент корреляции равен 0,9998.

The aim of the study is to develop an algorithm for directed analysis of clemastine in biological extracts from blood using a unified method of HPLC research. Materials and methods. The extraction of clemastine was carried out with chloroform at pH 9,0. The extracts were purified from impurities by a combination of TLC and extraction with hexane. TLC purification and identification of clemastine were carried out under optimal conditions: system of organic solvents – methanol - 25% solution of ammonium hydroxide (100:1,5) and chromatographic plates - Sorbfil PTLC-AF-A, Rf сlemastine = 0,60±0,03. For the detection of clemastine, the most sensitive location reagents were used - UV light (λ = 254 nm) and reagent Dragendorff in the modification of Mounier. Conclusions. Clemastine was extracted with chloroform at pH 9,0 from blood. Purification of extracts from co-extractive compounds was performed by combining TLC and extraction with hexane. It is established that when isolating сlemastine from blood according to the developed methods it is possible to allocate 36,05 - 39,55% of substance ( = ± 4,63 %, RSD = 1,67 %). The method of TLC purification and identification of сlemastine in biogenic extracts was tested under optimal conditions: system of organic solvents - methanol - 25% solution of ammonium hydroxide (100:1,5), location reagents - UV light, reagent Dragendorff in the modification of Mounier, Rf сlemastine = 0,60±0,03 (Sorbfil PTLC-AF-A). The unified HPLC method for identification and quantification of сlemastine was tested in biogenic extracts from blood according to the developed algorithm of directed analysis. It was found that сlemastine can be identified by retention time - 25,997 - 26,011 min; retention volume 2599,7 - 2601,1 μl; spectral ratios - 0,741; 0,536; 0,096; 0,023; 0,027; 0,005; 0,003. Equation was used to determine the сlemastine content S = 0,15·10-3 С + 0,14·10-3 the correlation coefficient was equal to 0,9998.