Розробка методів хіміко-токсикологічного аналізу кетотифену

Abstract

Розроблено методики ідентифікації кетотифену за допомогою кольорових реакцій, методів УФ-спектроскопії, ТШХ, ВЕРХ. Розроблено УФ-спектрофотометричну, екстракційно-фотометричну та ВЕРХ-методики кількісного визначення кетотифену, придатні для цілей хімі-ко-токсикологічного аналізу. На основі іонного асоціату кетотифену з фосфорномолібденовою кисло-тою запропоновано твердоконтактний кетотифенселективний електрод, що застосовано для виявлення та кількісного визначення кетотифену у витягах із біологічного матеріалу, в тому числі, за методикою визначення в мікро-об’ємах розчинів. Порівняно ефективність загальних методів ізолювання органічних речо-вин основного характеру щодо кетотифену та розроблено окрему методику ізолювання кетотифену із біоматеріалу. Обґрунтовано схему хіміко-токсикологічного аналізу біоматеріалу на ке-тотифен та доповнення до загальної схеми ТШХ-скринінгу органічних речо-вин, що дозволяють не втратити кетотифен при проведенні неспрямованого дослідження.

Диссертационная работа посвящена комплексному химико-токсикологи-ческому исследованию кетотифена. Идентификацию кетотифена проводили химическими (цветные реакции) и физико-химическими методами (ТСХ, ВЭЖХ, УФ-спектроскопия). Показано, что среди общепринятых реактивов для идентификации кето-тифена можно использовать реактивы Вагнера, Бушарда, Драгендорфа, Ман-делина, Фреде, раствор кобальта тиоцианата, и предложены более специфич-ные для обнаружения кетотифена реагенты – раствор 2,4-динитрофенил-гидразина, диазотированная сульфаниловая кислота в щелочной среде и модифицированный реактив Марки при нагревании. ТСХ-исследование проводили в 14 общепринятых в химико-токсикологическом анализе системах растворителей. Изучено поведение кето-тифена в условиях общего ТСХ-скрининга органических веществ основного ха-рактера, в частности, его отношение к групповым проявителям. Идентификация кетотифена проведена методом ВЭЖХ с использовани-ем ВЭЖХ-анализатора «Милихром А-02». Установлены основные хромато-графические параметры кетотифена – время и объем удерживания, спек-тральные отношения, а также минимальная концентрация вещества в раство-ре, которую можно определить с помощью используемой методики. Разработан твердоконтактный ионселективный электрод с пластифициро-ванной поливинилхлоридной мембраной для определения концентрации ионов кетотифена в водных растворах. Электродная функция разработанного элек-трода линейна в интервале концентраций 1,0∙10–4 – 1,0∙10–2 моль/дм3 с крутиз-ной 58,1±0,2 мВ. Минимальная концентрация кетотифена, которую можно определить данным электродом, составляет 3,2∙10–5 моль/дм3. Потенциал ион-селективного электрода на кетотифен стабилен в интервале рН 4,0 – 9,0. Предложенный электрод применен для количественного ионометриче-ского определения кетотифена в модельных растворах и извлечениях из био-логического материала. Разработаны методики (УФ-спектрофотометрическая, экстракционно-фотометрическая и ВЭЖХ) количественного определения кетотифена, при-годные для целей химико-токсикологического анализа . Установлены оптимальные условия (природа органического растворите-ля, рН среды) экстракции кетотифена из водных растворов органическими растворителями. Показано, что гексан можно использовать для экстракцион-ной очистки кислых и щелочных водных извлечений из биологического мате-риала от соэкстрактивных веществ, поскольку он не экстрагирует кетотифен из водных растворов независимо от значения рН среды. Наиболее высокую степень экстракции препарата обеспечивают хлороформ и диэтиловый эфир в щелочной среде. Впервые проведено сравнение эффективности общепринятых в химико-токсикологическом анализе методов изолирования органических веществ ос-новного характера по отношению к кетотифену. Разработан эффективный и экспрессный индивидуальный метод изолирования кетотифена из биологиче-ского материала с помощью хлороформа и предложены методики выделения кетотифена из биологических жидкостей организма (крови, мочи). Разработана методика очистки кетотифена от соэкстрактивных веществ в извлечениях из биологического материала с применением метода ТСХ. Предложено изолировать кетотифен из мочи после предварительного кислотного гидролиза; методика демонстрирует высокую эффективность (~90%) і может быть использована для изолирования из биологической жид-кости не только нативного вещества, но и кетотифена, полученного в резуль-тате гидролиза его основного метаболита – кетотифен N-глюкуронида. Установлен срок сохраняемости (6 месяцев) кетотифена в биологическом материале при его гнилостном разложении. На основе систематических исследований обоснована схема направленно-го химико-токсикологического анализа биологического материала на кетоти-фен, которая включает методики его изолирования из биологического матери-ала, идентификации посредством комплекса цветных реакций и методов УФ-спектроскопии, ТСХ и ВЭЖХ, а также количественного определения. Кроме того, внесены дополнения в общую схему ТСХ-скрининга органических веществ, которые позволяют обнаружить кетотифен при проведении ненаправ-ленного исследования.

Thesis is devoted to ketotifen complex chemical and toxicological research. The procedures of ketotifen identification by coloured reactions, UV-spec-troscopy, TLC and HPLC have been developed. The procedures of ketotifen quantitative determination by such methods as UV-spectrophotometry, extraction photometry and HPLC, which are suitable for the purposes of chemical and toxicological analysis, have been developed. The ketotifen-selective solid contact electrode has been offered on the basis of ionic associate of ketotifen with phosphomolybdic acid, the electrode has been used for detection and quantitative determination of ketotifen in extracts from biological material including by the determination procedure in the solutions microvolumes. Efficiency of basic organic substances isolation general methods in relation to ketotifen has been compared and the individual method of ketotifen isolation from biomaterial has been developed. The scheme of chemical and toxicological analysis of biomaterial for ketotifen and additions to general scheme of organic substances TLC-screening, which allow not to lose ketotifen during undirected research, have been grounded.