Development and determination of validation parameters for the hplc method of thymol quantification in “Kalinol plus” syrup

Abstract

The HPLC method of thymol quantification has been developed for the combined medicine – “Kalinol plus” syrup (produced by “Azerpharm LTD”), which consists of the brotherwort (Thymus serpyllum) extract, sugar syrup, potassium bromide and 80% ethanol. The optimal conditions for quantitative determination of thymol in “Kalinol plus” have been found when carrying out the analysis under different conditions. They are: the flow rate – 1 mL/min, the temperature – 30°С, the volume of injection – 10 μL, the detection wavelength – 274 nm, the type of stationary phase – Zorbax SB-C18 Ø4.6×250 mm, 5 μm, and the mobile phase composition (the mixture of water and acetonitrile (50:50) in the isocratic elution mode), the mass of the sample to be analysed – 1.0 g, the time of analysis – 15 min. It has been found that the analyte peak on the chromatogram is well separated from the peaks of the excipients and other components of the active substance. The validation characteristics of the method proposed have been studied. According to the results obtained the procedure developed is characterised by the acceptable linearity (b = 1.037, a = –5.587, RSD0 = 1.715, Rc = 0.9959), accuracy (δ = 0.16) and precision (Δz = 1.54) in the range of the method application (70-130% of the nominal concentration). Small changes in the flow rate (from 0.8 mL/min to 1.2 mL/min), temperature (from 27°С to 33°С) and the mobile phase composition (from (47:53) to (47:53) ratio) insignificantly affect the values of the symmetry factor of the principal peak, relative standard deviation and the number of theoretical plates. The results of studying stability indicate that the solution to be analysed may be chromatographed within 1 day without losses in accuracy and precision. According to the results the method can be recommended for use in the analysis of “Kalinol plus” syrup.

Розроблено ВЕРХ-методику кількісного визначення тимолу у комбінованому лікарському пре- параті – сиропі «Калинол плюс» виробництва «ТОВ Азерфарм», до складу якого входить екс- тракт чебрецю, цукровий сироп, калію бромід та 80% етанол. Були знайдені оптимальні умови кількісного визначення тимолу в сиропі «Калинол плюс» – швидкість потоку (1 мл/хв), температура (30°С), об’єм введеної проби (10 мкл), довжина хвилі детектора (274 нм), тип нерухомої фази (Zorbax SB-C18 Ø4,6´250 мм, 5 мкм) та склад рухомої фази (суміш води та ацетонітрилу (50:50) в режимі ізократичного елюювання), маса зразка для аналізу (1,0 г), час аналізу (15 хв) – шляхом проведення аналізу за різних умов. Встановлено, що пік аналіту на хроматограмі добре розділяється з піками допоміжних речовин та інших компонентів актив- ної субстанції. Вивчені валідаційні параметри запропонованої методики. Згідно з отриманими результатами розроблена процедура характеризується прийнятною лінійністю (b = 1,037, a = –5,587, RSD0 = 1,715, Rc = 0,9959), правильністю (δ = 0,16) та збіжністю (Δz = 1,54) у рам- ках діапазону застосування (70-130% від номінального вмісту). Невеликі зміни швидкості по- току (від 0,8 мл/хв до 1,2 мл/хв), температури (від 27°С до 33°С) і складу рухомої фази (спів- відношення від (47:53) (47:53)) невагомо впливають на значення коефіцієнта симетрії піку, відносного стандартного відхилення і числа теоретичних тарілок. Результати вивчення стабільності свідчать про те, що аналізований розчин можна хроматографувати протягом 1 дня без погіршення правильності та прецизійності. За результатами досліджень методи- ка може бути рекомендована для використання в аналізі сиропу «Калинол плюс».

Разработана ВЭЖХ-методика количественного определения тимола для комбинированно- го лекарственного препарата – сиропа «Калинол плюс» производства «ООО Азерфарм», в состав которого входит экстракт чабреца, сахарный сироп, калия бромид и 80% эта- нол. Были найдены оптимальные условия количественного определения тимола в сиропе «Калинол плюс» – скорость потока (1 мл/мин), температура (30°С), объем вводимой пробы (10 мкл), длина волны детектора (274 нм), тип неподвижной фазы (Zorbax SB-C18 Ø4,6´250 мм, 5 мкм) и состав подвижной фазы (смесь воды и ацетонитрила (50:50) в режиме изократи- ческого элюирования), масса образца для анализа (1,0 г), время анализа (15 мин) – путем проведения анализа в различных условиях. Установлено, что пик аналита на хроматограм- ме хорошо разделяется с пиками вспомогательных веществ и других компонентов актив- ной субстанции. Изучены валидационные параметры предложенной методики. Согласно полученным результатам разработанная процедура характеризуется приемлемой линей- ностью (b = 1,037, a = –5,587, RSD0 = 1,715, Rc = 0,9959), правильностью (δ = 0,16) и сходи- мостью (Δz = 1,54) в рамках диапазона применения (70-130% от номинального содержания). Небольшие изменения скорости потока (от 0,8 мл/мин до 1,2 мл/мин), температуры (от 27°С до 33°С) и состава подвижной фазы (соотношение от (47:53) до (47:53)) незначительно влия- ют на значения коэффициента симметрии пика, относительного стандартного отклонения и числа теоретических тарелок. Результаты изучения стабильности свидетельствуют о том, что анализируемый раствор можно хроматографировать в течение 1 дня без ухуд- шения правильности и прецизионности. По результатам исследований методика может быть рекомендована для использования в анализе сиропа «Калинол плюс».