Application of the kinetic enzymatic method for benzalkonium chloride determination in an aerosol preparation

Abstract

A new kinetic photometric method for BAC determination based on an inhibition of the enzymatic (cholinesterase) reaction was proposed. The reaction rate was detected at unhydrolised acetylcholine residue, which is determined by the amount of peracetic acid, producted during the impact of H2O2 on it. Indicator reaction is a reaction of peracetic acid with 4-ethoxyaniline interaction that leads to the formation of azoxyphenetole with λmax = 358 nm (lgε =4.18). The measurement velocity of changing of light absorption vs. time (∆А/∆t, min-1) give a chance to quantitatively determination of BAC. The results confirmed that the method is linear at concentrations ranging from 1.0×10-6 mol/L to 5.0 ×10 -6 mol/L. Depending calibration equation ΔA/Δt, min-1 from the village BAC has the form: tgα = 5093 c + 0.0075 (r = 0,999),recovery 99,9%. LOD was 0.4× 10-6 mol/L. The method was satisfactorily applied to the determination of BAC in nasal pharmaceutical preparation «Aqua-rinosol». The recovery was 99.9%, RSD = 2.7 % (n=5, P=0.95). This method is beneficial because high sensitivity and selectivity can be achieved using relatively simple technical equipment.

Запропоновано новий кінетичний фотометричний метод визначення BAC на основі інгібування ферментативної (холінестерази) реакції. Швидкість реакції визначена по негідролізованому ацетилхоліновому залишку, який визначається кількістю пероцтової кислоти, яка утворюється під впливом Н2О2. Індикаторна реакція - це реакція пероцтової кислоти з взаємодією 4-етоксианіліну, що призводить до утворення азоксифенетолу з λmax = 358 нм (lgε = 4,18). Швидкість вимірювання зміни абсорбції світла та часу (ΔА / Δt, min-1) дає змогу кількісно визначити BAC. Результати підтвердили, що метод лінійний при концентраціях від 1,0 × 10-6 моль / л до 5,0 × 10 -6 моль / л. Залежно від рівняння калібрування ΔA / Δt, min-1 від села BAC має вигляд: tgα = 5093 c + 0,0075 (r = 0,999), відновлення 99,9%. LOD становило 0,4 × 10-6 моль / л. Метод було задовільно застосований до визначення ВАК в назальному фармацевтичному препараті «Аква-риносол». Відновлюваність була 99,9%, РСД = 2,7% (n = 5, P = 0,95). Цей метод є корисним, оскільки високу чутливість та вибірковість можна досягти за допомогою відносно простого технічного обладнання.

Был предложен новый кинетический фотометрический метод определения BAC, основанный на ингибировании ферментативной (холинэстеразы) реакции. Скорость реакции определяли на негидролизированном ацетилхолиновом остатке, который определяется количеством надуксусной кислоты, продуцируемой во время воздействия на нее H2O2. Индикаторная реакция представляет собой реакцию взаимодействием надуксусной кислоты с 4-этоксианилина, что приводит к образованию азоксифентола с λmax = 358 нм (lgε = 4,18). Измеряемая скорость изменения поглощения света по времени (ΔА / Δt, min-1) дает возможность количественно определять BAC. Результаты подтвердили, что метод является линейным при концентрациях от 1,0 × 10-6 моль / л до 5,0 × 10 -6 моль / л. В зависимости от калибровочного уравнения ΔA / Δt, min-1 от деревни BAC имеет вид: tgα = 5093 c + 0,0075 (r = 0,999), восстановление 99,9%. LOD составлял 0,4 × 10-6 моль / л. Метод был удовлетворительно применен к определению ВАС в носовом фармацевтическом препарате «Аква-ринозол». Воспроизводимость составило 99,9%, RSD = 2,7% (n = 5, P = 0,95). Этот метод выгоден, поскольку высокая чувствительность и селективность могут быть достигнуты с использованием относительно простого технического оборудования