Дослідження пропранололу ВЕРХ-методом, придатні для хіміко-токсикологічного аналізу

Abstract

Актуальність. Терапевтичний моніторинг при використанні пропранололу гідрохлориду, аналіз препара- ту в лікарських формах та біологічних об’єктах, ідентифікація та кількісне визначення препарату при інтокси- кації проводяться за допомогою чутливих та селективних методів. Серед сучасних методів аналізу для ство- рення бази даних – параметрів ідентифікації та кількісного визначення масивів аналітів у біологічних об’єктах метод ВЕРХ є одним із найбільш придатних методів з високою чутливістю та селективністю. Пропранололу гід- рохлорид (анаприлін) – (±) 1-ізопропіламіно-3-(1-нафтилокси)-2-пропанолу гідрохлорид – неселективний бло- катор β-адренорецепторів, який характеризується антиангінальним, антигіпертензивним та антиаритмічним ефектами та застосовується при лікуванні ішемічної хвороби серця, порушеннях серцевого ритму та деяких формах гіпертонічної хвороби. Розроблені раніше ВЕРХ-методики аналізу пропранололу базуються на засто- суванні різноманітних умов хроматографування (склад рухомої фази, ізократичне або градієнтне елюювання, детектування при одній або декількох довжинах хвилі, вибір чутливого та селективного детектора), які зумов- лені індивідуальними властивостями речовини. Враховуючи можливість комплексного лікування захворювань серцево-судинної системи при використанні різних лікарських препаратів, проведення аналізу за уніфікованою ВЕРХ-методикою є актуальною задачею дослідження. Метою даної роботи є ідентифікація та кількісне визначення пропранололу гідрохлориду за уніфікованою ВЕРХ-методикою, яка дозволяє отримувати надійні та відтворювані результати досліджень, придатні для ана- лізу препарату у біологічних об’єктах. Матеріали та методи. Хроматографування досліджуваної речовини проводили на мікроколоночному рі- динному хроматографі «Міліхром А-02» («ЕкоНова», м. Новосибірськ, Росія) в обернено-фазному варіанті при застосуванні металевої колонки з неполярним сорбентом Prontosil 120-5C 18 AQ, 5 мкм. При елююванні пре- парату застосовували суміші розчинників – ацетонітрилу з 0,2 М розчином літію перхлорату у 0,005 М розчині кислоти хлорної. Лінійний градієнт – від елюенту А (5 % ацетонітрилу та 95 % буферного розчину) до елюенту Б (100 % ацетонітрилу) впродовж 40 хв створював умови для виходу з колонки усіх складових частин проби у вигляді вузьких зон. Швидкість надання розчинника в колонку складала 100 мкл/хв; температура колонки –37-40 °С; тиск насосу – 2,8-3,2 МПа; об´єм проби для введення – 4 мкл. Багатоканальне детектування речовини виконували УФ-детектором за 8 значеннями довжини хвилі: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 та 300 нм. Результати та їх обговорення. При проведенні ідентифікації пропранололу встановлені абсолютні часи утримування (19,40-19,54 хв) та об´єми утримування (1940,8-1955,2 мкл), спектральні відношення, межа вияв- лення препарату у пробі (4,0 мкг/мл або 16,0 нг у пробі), значення коефіцієнтів симетрії піків речовини (0,94-1,10) та коефіцієнтів ємності (11,94-12,04). Методом найменших квадратів розраховані коефіцієнти регресії граду- ювального графіка, якому відповідало рівняння прямої S = 0,00565 С. Коефіцієнт кореляції дорівнював 0,9987. Розраховані валідаційні характеристики ВЕРХ-методики визначення пропранололу: діапазон лінійності (5,0-100,0 мкг/мл), межу кількісного визначення (5,0 мкг/мл або 20 нг у пробі), правильність і точність за результатами кількіс- ного визначення препарату ВЕРХ-методом у модельних розчинах. Встановлено, що відносна невизначеність се- реднього результату не перевищувала ± 2,11 % при використанні запропонованої методики ВЕРХ-аналізу про- пранололу гідрохлориду у модельних розчинах. Висновки. Проведено ідентифікацію та кількісне визначення пропранололу гідрохлориду при викорис- танні уніфікованої ВЕРХ-методики, придатної для хіміко-токсикологічного дослідження.

Topicality. Therapeutic monitoring when using propranolol hydrochloride, analysis of the drug in dosage forms and biological objects, identification and quantitative determination of the drug during intoxication are carried out using sensitive and selective methods. Among the modern methods of analysis for creating a database of parameters of identification and quantitative determination of analytes arrays in biological objects HPLC method is one of the most suitable methods with high sensitivity and selectivity. Propranolol hydrochloride (anaprilin) – (±)1-isopropylamino-3-(1-naphthyloxy)- 2-propanol hydrochloride – non-selective β-adrenoceptor blocker, which is characterized by antianginal, antihypertensive and antiarrhythmic effects and is used for treatment of coronary heart disease, heart rhythm disorders and some forms of hypertension. Previously developed HPLC methods of propranolol analysis are based on the application of various chromatographic conditions (mobile phase composition, isocratic or gradient elution, detecting at one or several wavelengths, selection of sensitive and selective detector) due to individual properties of a substance. Taking into account the possibility of complex treatment of diseases of the cardiovascular system with the use of different drugs, the analysis by a unified HPLC methodology is an actual task of the study. Aim. To identify and to make quantitative determination of propranolol hydrochloride by a unified HPLC methodology, which allows obtaining reliable and reproducible research results that are suitable for drug analysis in biological objects. Materials and methods. Chromatography of the investigated substance was performed on a microcolonial liquid chromatograph “Milichrome A-02” (“EcoNova”, Novosibirsk, Russia) in an reverse-phase variant using a metal column with a nonpolar sorbent Prontosil 120-5C 18 AQ, 5 μm. For elution of the drug were used a mixture of solvents - acetonitrile with 0.2 M solution of lithium perchlorate in 0.005 M solution of acid perchloric. The linear gradient from eluent A (5 % acetonitrile and 95 % buffer solution) to eluent B (100 % acetonitrile) for 40 minutes created conditions for the exit from the column of all component parts of the sample as narrow zones. The flow rate of the mobile phase has been formed 100 μl/min, column temperature – 37-40 °С; pump pressure – 2.8-3.2 MPa; injection volume – 4 μl. Multi-channel detection of a substance was performed by a UV detector in 8 wavelengths: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 and 300 nm. Results and discussion. While carrying out identification of propranolol, it was established absolute parameters of retention time (19.40-19.54 min) and retention volume (1940.8-1955.2 μl), spectral relationships, detection limit of the substance in the sample (4.0 μg/ml or 16.0 ng in the sample), the values of the coefficients of the symmetry of the peaks of the substance (0.94-1.10) and the coefficients of capacity ratio (11.94-12.04). The regression coefficients of the calibration graph, which corresponds to the equation of the straight line S = 0.00565 С were calculated by the least squares method. The correlation coefficient was equal to 0.9987. Validation characteristics of HPLC-method for determination of propranolol: linearity range (5.0-100.0 μg/ml), limit of quantitative determination (5.0 μg/ml or 20 ng in the sample), correctness and accuracy on the basis of the results of the quantitative determination of the preparation by the HPLC method in model solutions were calculated. It was established that the relative uncertainty of the average result did not exceed ± 2,11 % when using the proposed method of HPLC analysis of propranolol hydrochloride in model solutions. Conclusions. Identification and quantitative determination of propranolol hydrochloride with the use of a unified HPLC method suitable for a chemical toxicological study was carried out.

Актуальность. Терапевтический мониторинг при использовании пропранолола гидрохлорида, анализ пре- парата в лекарственных формах и биологических объектах, идентификация и количественное определение пре- парата при интоксикации проводятся при помощи чувствительных и селективных методов. Среди современных методов анализа для создания базы данных – параметров идентификации и количественного определения мас- сивов аналитов в биологических объектах метод ВЭЖХ является одним из наиболее пригодных методов с высо- кой чувствительностью и селективностью. Пропранолола гидрохлорид (анаприлин) – (±) 1-изопропиламино- 3-(1-нафтилокси)-2-пропанола гидрохлорид – неселективный блокатор β-адренорецепторов, который характе- ризуется антиангинальным, антигипертензивным и антиаритмичным эффектами и используется при лечении ишемической болезни сердца, нарушениях сердечного ритма и некоторых формах гипертонической болезни. Разработанные ранее ВЭЖХ-методики анализа пропранолола основываются на применении разнообразных условий хроматографирования (состав подвижной фазы, изократическое или градиентное элюирование, де- тектирование при одной или нескольких длинах волны, выбор чувствительного и селективного детектора), которые обусловлены индивидуальными свойствами вещества. Учитывая возможность комплексного лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы при использовании различных лекарственных препаратов прове- дение анализа по унифицированной ВЭЖХ-методике является актуальной задачей исследования. Целью данной работы является идентификация и количественное определение пропранолола гидрохло- рида по унифицированной ВЭЖХ-методике, которая позволяет получать надежные и воспроизводимые резуль- таты исследований, пригодные для анализа препарата в биологических объектах. Материалы и методы. Хроматографирование исследуемого вещества проводили на микроколоночном жид- костном хроматографе «Миллихром А-02» («ЭкоНова», Новосибирск, Россия) в обращенно-фазном варианте при использовании металлической колонки с неполярным сорбентом Prontosil 120-5C 18 AQ, 5 мкм. При элюирова- нии препарата применяли: смеси растворителей (ацетонитрила с 0,2 М раствором лития перхлората в 0,005 М растворе кислоты хлорной). Линейный градиент – от элюента А (5 % ацетонитрила и 95 % буферного раствора) до элюента Б (100 % ацетонитрила) в течение 40 мин создавал условия для выхода из колонки всех составных частей пробы в виде узких зон. Скорость подачи растворителя в колонку составляла 100 мкл/мин; температура колонки –37-40 °С; давление насоса – 2,8-3,2 МПа; объем пробы для введения – 4 мкл. Многоканальное детектирова- ние вещества выполняли УФ-детектором по 8 значениям длины волны: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм. Результаты и их обсуждение. При проведении идентификации пропранолола установлено абсолютные время удерживания (19,40-19,54 мин) и объем удерживания (1940,8-1955,2 мкл), спектральные отношения, предел обнаружения препарата в пробе (4,0 мкг/мл или 16,0 нг в пробе), значения коэффициентов симметрии пиков вещества (0,94-1,10) и коэффициентов емкости (11,94-12,04). Методом наименьших квадратов рассчи- таны коэффициенты регрессии градуировочного графика, которому соответствовало уравнение прямой S = 0,00565 С. Коэффициент корреляции был равен 0,9987. Рассчитаны валидационные характеристики ВЭЖХ-методики определения пропранолола: диапазон линейности (5,0-100,0 мкг/мл), предел количественного определения (5,0 мкг/мл или 20 нг в пробе), правильность и точность по результатам количественного определения пре- парата ВЭЖХ-методом в модельных растворах. Установлено, что относительная неопределенность среднего результата не превышала ± 2,11 % при использовании предложенной методики ВЭЖХ-анализа пропранолола гидрохлорида в модельных растворах. Выводы. Проведено идентификацию и количественное определение пропранолола гидрохлорида при ис- пользовании унифицированной ВЭЖХ-методики, пригодной для химико-токсикологического исследования.