Хіміко-токсикологічне дослідження доксазозину

Abstract

Дисертацію присвячено хіміко-токсикологічному дослідженню доксазозину. Розроблено методики ідентифікації доксазозину та деяких антигіпертензивних препаратів: α1-адреноблокаторів (празозину, теразозину, альфузозину), β-адреноблокатора (анаприліну), кардіоселективного β1-адреноблокатора (атенололу), антагоністу кальцієвих каналів (амлодипіну), за допомогою кольорових реакцій, методів УФ-спектрофотометрії, похідної спектрофотометрії, ТШХ, ВЕРХ, ГРХ. Розроблено методики кількісного визначення доксазозину за допомогою УФ-спектрофотометрії, похідної спектрофотометрії, екстракційної фотометрії, ВЕРХ, ГРХ, придатні для цілей хіміко-токсикологічного аналізу. Порівняно ефективність загальних методів ізолювання органічних сполук щодо доксазозину. Розроблено індивідуальний метод ізолювання доксазозину із біологічного матеріалу. Запропоновано методику очищення доксазозину від співекстракційних речовин у витяжках із біологічного матеріалу із застосуванням екстракції гексаном і ТШХ-методом. Вивчено розподіл доксазозину в органах отруєних тварин. Встановлено, що при летальних отруєннях доксазозином необхідно досліджувати шлунок і кишківник із вмістом, печінку, легені, мозок, нирки, сечу. При застосуванні ГРХ/МС і ВЕРХ/МС  методик проведено ідентифікування доксазозину та його метаболітів у витяжках з органів отруєних тварин. Встановлено термін зберігання доксазозину в біологічному матеріалі при його гнитті. Обґрунтовано схему спрямованого хіміко-токсикологічного аналізу біоматеріалу на доксазозин. Наукова новизна результатів роботи підтверджена патентами та інформаційними листами.

Диссертационная работа посвящена химико-токсикологическому исследованию доксазозина. Идентификацию доксазозина проводили химическими (осадочные и цветные реакции) и физико-химическими (ТСХ, ВЭЖХ, ГЖХ, УФ-спектрофотометрия, производная УФ-спектрофотометрия) методами. ТСХ-методом с использованием трех типов хроматографических пластин и 18 систем растворителей изучено хроматографическое поведение доксазозина в присутствии некоторых антигипертензивных препаратов: α1-адреноблокаторов (празозина, теразозина, альфузозина), β-адреноблокатора (анаприлина), кардиоселективного β1-адреноблокатора (атенолола), антагониста кальциевых каналов (амлодипина). Установлено, что наиболее чувствительными проявителями при ТСХ-анализе доксазозина являются УФ-свет (λ = 254 нм) и реактив Драгендорфа, модифицированный по Мунье. При ВЭЖХ-анализе доксазозина и некоторых антигипертензивных препаратов установлены основные параметры идентификации: время и объем удерживания, спектральные отношения, а также параметры разделения пиков. Установлено, что минимальная концентрация доксазозину в растворе, которую можно определить при помощи разработанной методики, равна 2 мкг/мл, что соответствует содержанию вещества в пробе 8 нг (проба – 4 мкл). В результате ГЖХ-анализа установлено, что разработанная хроматографическая методика характеризуется селективностью и высокой чувствительностью, так как минимальная концентрация доксазозина в растворе, которую можно определить при помощи разработанной методики, равна 0,15 мкг/мл, что соответствует содержанию вещества в пробе 0,3 нг (проба – 2 мкл). При идентификации методом УФ-спектрофотометрии установлено, что оптимальными условиями, которые обеспечивают наибольшую чувствительность анализа, являются использование етанольного раствора доксазозина, λmax = 250 ± 2 нм, = 1282. Разработаны методики УФ-спектрофотометрии, производной спектрофотометрии, экстракционной фотометрии, ВЭЖХ, ГЖХ количественного определения доксазозина, пригодные для целей химико-токсикологического анализа. Для расчета содержания доксазозина в модельных растворах разработанными методами использованы градуировочные графики, коэффициенты регрессии уравнений которых рассчитаны методом наименьших квадратов. Установлены оптимальные условия экстракции доксазозина из водних растворов органическими растворителями в зависимости от рН среды. Наиболее высокую степень экстракции доксазозина обеспечивают хлороформ и диэтиловый эфир в щелочной среде. Проведена сравнительная оценка эффективности общепринятых методов изолирования органических соединений основного характера относительно доксазозина и разработан индивидуальный метод изолирования доксазозина из биологического материала. Предложена методика очищения доксазозина от соэкстрактивных веществ в вытяжках из биологического материала с использованием экстракции гексаном и ТСХ-методом. Изучено распределение доксазозина в органах отравленных животных. Установлено, что при летальных отравлениях доксазозином необходимо исследовать желудок и кишечник с содержимым, печень, легкие, мозг, почки, мочу. Идентификация доксазозина и его метаболитов в полученных вытяжках из органов отравленных животных проведена ГЖХ/МС и ВЭЖХ/МС-методами. Установлены сроки сохранения доксазозина в биологическом материале при его гнилостном разложении. На основе систематических исследований обоснована схема направленного химико-токсикологического анализа биоматериала на доксазозин, которая включает методики его изолирования из биологического материала, очищения полученных вытяжек, идентификации и количественного определения.

The thesis is devoted to chemical-toxicological analysis of doxazosin. Sensible methods of doxazosin and some antihyperthensive drugs such as α1 –adrenoceptor bloking agent (doxazosin and other quinazolin derivatives –prazosin, alfuzosin, terazosin), β–adrenoceptor bloking agent (anaprilin), cardio-selective β1–adrenoceptor bloking agent (atenolol), calcium-channel bloker (amlodipin) by coloured reactions, methods UV–spectrophotometry, derivative spectrophotometry, thin layer chromathography (TLC), high perfomance liquid chromathography (HPLC), gas – liquid chromathography (GLC) were developed. The methods UV–spectrophotometry, derivative spectrophotometry, extraction-photometric method, HPLC, GLC methods of quantitative determination of doxazosin, which are suitable for aims of chemical – toxicological analysis, were developed. The efficiency of general methods of isolation of organic combinations in regard to doxazosin was compared. The individual method of isolation of doxazosin from biological material was developed. The method of cleaning of doxazosin from coextractive admixtures in extracts of biological material, with the use of the extraction of hexan and TLC–method was proposed. The distribution of doxazosin in the organs of poisoned animals was studied. It was discovered, that it is necessary to study the stomac, bowels with their contened, liver, lungs, brain, kidneys, urine in case of lethal poisoning. The GLC–method and HPLC–method with mass–spectrum detection were used for identification of doxazosin and metabolites in extracts from organs of poisoning animals. The term, during which doxazosin can be found in biological material of its decay, was determined. Scheme of chemical-toxicological analysis of biological material for doxazosin was grounded. The scientific novelty of results of the work is confirmed by patents and newsletters.