Фітохімічне вивчення екстрактів собачої кропиви для створення нових лікарських засобів.

Abstract

Дисертаційну роботу присвячено комплексному фітохімічному вивченню модифікованих сухих екстрактів собачої кропиви звичайної та вихідної сировини (трави, настойки) для створення нових потенційних стандартизованих лікарських засобів з психотропною, анксіолітичною та діуретичною активністю. Розроблено способи одержання модифікованих сухих екстрактів на основі собачої кропиви настойки з використанням 12 амінокислот (лізин, аспарагінова та глутамінова кислоти, лейцин, аланін, фенілаланін, гліцин, валін, гістидин, аргінін, цистеїн та метіонін). В одержаних сухих модифікованих екстрактах виявлено 15 основних речовин фенольної природи, 8 з яких було ідентифіковано та визначено їх кількісний вміст: 10 фенолкарбонових та гідроксикоричних кислот, 3 з яких ідентифіковано (хлорогенова, кофейна та розмаринова кислоти). Серед флавоноїдів ідентифіковано катехін, гіперозид та рутин. В екстрактах визначено значний вміст елагової, кофейної та хлорогенової кислот. Дослідження впливу екстрактів собачої кропиви на поведінкові реакції засвідчили, що найбільш ефективними субстанціями з анксіолітичною дією є екстракти, модифіковані з лізином, гліцином, аланіном, валіном, фенілаланіном та аргініном. Екстракт з фенілаланіном виявив виражену діуретичну активність. Розроблено проєкти МКЯ та згідно з їх вимогами проведено дослідження сухих модифікованих екстрактів з собачої кропиви трави.

Диссертация посвящена комплексному фитохимическому изучению модифицированных сухих экстрактов пустырника и исходного сырья (травы, настойки) для создания новых потенциальных стандартизированных лекарственных средств с психотропной активностью. Разработаны способы получения модифицированных сухих экстрактов на основе пустырника настойки с использованием 12 аминокислот (лизин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты, лейцин, аланин, фенилаланин, глицин, валин, гистидин, аргинин, цистеин и метионин). В полученных экстрактах обнаружено 15 основных веществ фенольной природы, 8 из которых были идентифицированы, и установлено их количественное содержание: 10 фенолкарбоновых и гидроксикоричных кислот, 3 из которых идентифицированы (хлорогеновая, кофейная и розмариновая кислоты). Среди флавоноидов идентифицированы катехин, гиперозид и рутин. В экстрактах выявлено значительное содержание эллаговой, кофейной и хлорогеновой кислот. Исследование влияния экстрактов пустырника на поведенческие реакции показали, что наиболее эффективными веществами с анксиолитическим действием оказались экстракты, модифицированные с лизином, глицином, аланином, валином, фенилаланином и аргинином. Экстракт с фенилаланином показал выраженную диуретическую активность. Разработаны проекты МКЯ и в соответствии с их требованиями проведены исследования сухих экстрактов из травы пустырника.

The dissertation presents a complex phytochemical study of the modified dry Leonurus cardiaca extracts and raw materials (herbs, tinctures) for creating new potential standardized medicines with psychotropic activity. As a result of phytochemical analysis of BAS by HPLC tinctures of herb, leaves, flowers and stems of Leonurus cardiaca, 6 substances were identified: 3 flavonoids (rutin, apigenin and catechin), 3 hydroxycinnamic acids (chlorogenic, rosemary and caffeic acids), and their quantitative contents were established. It was found that flowers accumulate more hydroxycinnamic acids, the main component of which is chlorogenic acid, while a significant amount of flavonoids accumulate in the leaves. When studying the dynamics of extraction of phenolic compounds from Leonurus cardiaca herb on the basis of mathematical processing of the obtained data, the effective parameter of extraction frequency (2 times) was determined. It was found that the greatest sedative activity showed substances that contain a significant amount of iridoids, which indicates the feasibility of additional standardization of Leonurus cardiaca herb, tinctures and its extracts on the content of this group of BAS. The quantitative determination of the iridoid content was proposed to perform by the spectrophotometric method calculated with reference to harpagide acetate. The content of iridoids in the motherwort herb should be at least 0.4 %. The content of iridoids in the motherwort tincture should be at least 0.04 %. As a result of studying compounds of terpenoid nature in the liquid extract of motherwort 73 volatile compounds were found, 35 of them (monocyclic and bicyclic monoterpenoids, sesquiterpenoids, etc.) were identified. Among them there were 13 monoterpenoids, 10 sesquiterpenoids, diterpene and aliphatic alcohols, long-chain aliphatic acids and their esters and phytosterols. The dominant compounds among substances of terpenoid nature were phytol, bornyl acetate, thymol, camphene, α-pinene, p-cymene, caryophyllene, caryophyllene oxide. Methods for obtaining modified dry extracts based on Leonurus cardiaca tincture using 12 amino acids (lysine, aspartic and glutamic acid, leucine, alanine, phenylalanine, glycine, valine, histidine, arginine, cysteine and methionine) have been developed. As a result of TLC analysis of the obtained dry modified extracts, the following groups of BAS were identified: flavonoids (rutin and hyperoside), derivatives of hydroxycinnamic acids (chlorogenic and caffeic acids), iridoid compounds (harpagide, harpagide acetate and ayugozid). HPLC extracts revealed 15 main substances of phenolic nature, 8 of which were identified: 10 phenolic and hydroxycinnamic acids, 3 of which were identified (chlorogenic, caffeic and rosemary acids). Among flavonoids, catechin, hyperoside and rutin have been identified. Significant content of ellagic, caffeic and chlorogenic acids was determined in the extracts. Methoxyapigenin, ellagic acid and cathechin found in theresearch do not mentioned in motherwort before. Quantitative content of the sum of flavonoids, iridoids and polyphenols was determined in the extracts by spectrophotometric method. Based on the results of phytochemical analysis of the extracts, it can be concluded that the composition of phenolic compounds does not differ significantly, and the main differences are related to amino acids, which probably have an effect on the overall psychotropic effect. Studies of the effect of Leonurus cardiaca extracts on behavioural responses in the «open field» and «elevated cruciform labyrinth» tests have shown that the most effective substances as antidepressants are extracts modified by the introduction of amino acids: lysine, glycine, alanine, alanine and valine.Thus, the motherwort extracts in the complexes with valine, glycine and arginine were the most active; they led to an increase in the motor and exploratory activity of the experimental rats, while reducing the indicators of the animals’ emotional state.The anti-anxiety effect of compositions of the motherwort extracts with arginine, histidine, glycine, and valine appeared to be the most expressive.The results obtained indicate the presence of the motherwort extracts studied in the complex with amino acids of the anxiolytic activity. The extracts with glycine, valine and arginine were more effective in reducing anxiety in animals. The advantages of the extracts studied are the absence of action on the muscle tone and coordination of movements. In addition, the extract with phenylalanine showed pronounced diuretic activity. DMF projects have been developed. The DMF projects for the motherwort dry extracts were developed according to the following indicators: description, solubility, identification (TLC: method A (flavonoids), B (iridoids) and C (amino acid), loss on drying (not more than 10 %), residual amounts of organic solvents (ethyl alcohol – not more than 1.0 %), heavy metals (not more than 100 ppm), microbiological purity, the flavonoid content (not less than 2 % calculated with reference to hyperoside) and iridoids (not less than 0.5 % calculated with reference to harpagide acetate). The study of the dry extracts of Leonurus cardiaca herb have been carried out in accordance with their requirements. All of them corresponded to the developed parameters.