Експериментальне обґрунтування створення лікарського препарату для інтравагінального застосування з протизапальною та протимікробною активністю

Abstract

У дисертаційній роботі вперше на основі вивчення впливу компонентів досліджуваної комбінації на її антимікробну активність, виявлено комбінацію-лідер – МКІ-4 (метронідазол 100 мг, клотримазол 400 мг та ібупрофен 80 мг). Доведено, що комбінація-лідер відноситься до V класу токсичності «практично нетоксичні речовини» при в/шл введенні. За умови тривалого застосування МКІ-4 визначено відсутність її токсичного впливу на поведінкові реакції, масу тіла та внутрішніх органів, показники функціонального стану печінки, нирок. Доведено наявність позитивного впливу МКІ-4 на епітеліальну пластинку піхви та зменшення суми балів, що характеризують ступінь патологічного процесу при моделюванні ТВ, АВ у щурів. Встановлено вплив МКІ-4 на функціональні показники лейкоцитів периферичної крові, а саме їх перерозподіл, ФІ, ФЧ досліджуваних зразків in vivo на моделях ТВ, АВ. Експериментально доведено наявність терапевтичної дії МКІ-4 при лікувальному режимі введення на фоні сформованого вагініту змішаної етіології (S. aureus та C. albicans), що підтверджувалося нормалізацією стану епітелію піхви тварин та показників імунної системи після щоденного введення МКІ-4 протягом 5 днів. Встановлено наявність, інгібувальних властивостей МКІ-4 щодо біоплівок монокультур аеробних бактерій та бактеріально-грибкових асоціацій.

В диссертационной работе впервые на основе изучения влияния компонентов исследуемой комбинации на ее антимикробную активность выбрано комбинациюлидер ‒ МКИ-4 (метронидазол 100 мг, клотримазол 400 мг и ибупрофен 80 мг). Доказано, что комбинация-лидер относится к V классу токсичности «практически нетоксичные вещества» при внутрижелудочном введении и при интравагинальном введении. При длительном применении МКИ-4 токсическое воздействие на поведенческие реакции, массу тела и внутренних органов, показатели функционального состояния печени, почек отсутствует. Доказано наличие положительного влияния МКИ-4 на эпителиальную пластинку влагалища и уменьшение суммы баллов, характеризующих степень патологического процесса при моделировании ТВ, АВ у крыс. Установлено влияние МКИ-4 на функциональные показатели лейкоцитов периферической крови, а именно их перераспределение, ФИ, ФЧ исследуемых образцов in vivo на моделях ТВ, АВ. Экспериментально доказано наличие терапевтического действия МКИ-4 при лечебном режиме ввода на фоне сформированного вагинита смешанной этиологии, что подтверждалось нормализацией состояния эпителия влагалища животных и показателей иммунной системы после ежедневного однократного введения МКИ-4. Установлено наличие, ингибирующих свойств МКИ-4 относительно биопленок монокультур аэробных бактерий и бактериально-грибковых ассоциаций.

In the thesis, based on the study of the antimicrobial effect of the components of MC-1 – MC-15 samples, for the first time the leader-MCI– 4 (metronidazole 100 mg, clotrimazole 400 mg and ibuprofen 80 mg) combination was identified, which was studied in further experiments. New data on the safety of the MCI-4 combination have been obtained. It is proved that it belongs to grade V toxicity "Practically non-toxic compounds" when administered intragastrally and intravaginally. When using MCI-4 in doses of 9.42 mg/kg, 94.2 mg/kg and 942 mg/kg for 3 months, no toxic effect on behavioral reactions, body weight and internal organs, indicators of the functional state of the liver and kidneys was established. For the first time, morphometry proved a positive effect of MCI-4 at a dose of 53 mg/kg on the vaginal epithelial plate and a decrease in the sum of points that characterize the degree of the pathological process to 4 compared to TV 8 (P < 0.05) when modeling TV, AV in rats. The positive effect of MCI-4 on the functional parameters of peripheral blood leukocytes, namely their redistribution, phagocyte index, and phagocyte number of the studied samples in vivo on TV and AV models, was established. It is confirmed that vaginitis of mixed etiology is accompanied by inflammatory reactions that lead to a violation of the indicators of a specific link of the immune response (сytotoxic activity of lymphocytes, сytotoxic activity of macrophages, antibody-dependent cytotoxicity of lymphocytes, antibody-dependent cytotoxicity of macrophages, сytotoxic activity of lymphocytes+macrophages, antibody-dependent cytotoxicity of lymphocytes+macrophages, lysis ability of serum) and the accumulation of factors that at different stages of the inflammatory process block reactions mediated by lymphocytes or macrophages against the background of their preserved ability to manifest cytotoxic activity, in the blood serum. The therapeutic effect of MCI-4 pessaries in the therapeutic mode of administration in conditions of formed vaginitis of mixed etiology (S. aureus and C. albicans), which was confirmed by normalization of the state of the vaginal epithelium of animals and indicators of the immune system after a single daily administration of MCI-4 (53 mg/kg) for 5 days. Therapy with MCI-4 pessaries leads to activation of the body's immunological reactivity. It was found that the components of MCI-4 showed distinct inhibitory properties against biofilms of monocultures of aerobic bacteria, as well as bacterial-fungal associations, suppressed film formation by mixed culture, inhibition at the maximum studied concentration of clotrimazole (5000 µg/ml, dilution 1:80) was 81.7 %. A decrease in the concentration by 10 and 100 times was accompanied by a decrease in the antibiofilm effect (at 29.6 % and at 18.0 %, respectively, P < 0.05). The study revealed a clear antibiofilm activity of ibuprofen against monocultures of both bacteria (at concentrations of 20 µg/ml and 80 µg/ml, the inhibitory effect was 50.8 % and 72.3 %, respectively) and fungi. The distinct antibiofilm effect in MCI-4 against S. aureus (98,3 ± 0,5) %, C. albicans – (94.6 ± 0,8) %, and their microbial associations (S. aureus 222 + C. albicans) – (93.5 ± 2,1) % is shown