Експериментальне обґрунтування імуномодуляторної активності та нешкідливості порошку біомаси гриба Ganoderma Lucidum (Curt.:FR.) P.Karst.

Abstract

Дисертаційна робота присвячена дослідженню імуномодуляторної активності та нешкідливості порошку біомаси гриба (ПБГ) Ganoderma lucidum при експериментальному імунодефіциті. Встановлено, що біомаса гриба Ganoderma lucidum (штам 1900), отримана методом культивування на глюкозо-пептонному живильному середовищі з дріжджовим екстрактом, в умовах одноразового внутрішньошлункового введення відноситься до речовин IV класу токсичності – малотоксичні речовини. Доведена відсутність токсичного впливу ПБГ Ganoderma lucidum при введенні протягом 1, 3 та 6 місяців на показники функціонального стану печінки, нирок, ліпідного обміну, антиоксидантної системи піддослідних тварин. Встановлено, що застосування ПБГ Ganoderma lucidum протягом 30 діб приводить до підвищення активності чинників як гуморальної, так і клітинної імунної відповіді здорових тварин. Встановлено, що лікувальне введення ПБГ Ganoderma lucidum протягом 10 діб мишам лінії СВА/Са з модельованим вторинним імунодефіцитом (викликаним введенням циклофосфаміду) викликає відновлення фагоцитарної активності перитонеальних макрофагів. Застосування ПБГ Ganoderma lucidum сприяє також відновленню показників гуморального та клітинного імунітету, чинить нормалізувальний вплив на масові коефіцієнти та клітинність лімфоїдних органів тварин з модельованим вторинним імунодефіцитом.

Диссертационная работа посвящена фармакологическому изучению порошка биомассы гриба (ПБГ) Ganoderma lucidum, полученного методом культивирования на жидкой питательной среде (глюкозо-пептонной с дрожжевым экстрактом). В рамках исследования условий культивирования было установлено, что оптимальной средой для получения биомассы гриба Ganoderma lucidum (штамм 1900) является глюкозо-пептонная среда с дрожжевым экстрактом. Оптимальными условиями были определены следующие параметры: температура (t=28±1°С), кислотность среды (pH=5) и длительность культивирования (16 суток). Содержание суммы полисахаридов в полученной биомассе составляет 10,65%. В рамках исследования острой токсичности было установлено, что ПБГ Ganoderma lucidum относится к IV классу токсичности – малотоксичные вещества, по классификации К. К. Сидорова, поскольку однократное внутрижелудочное введение мышам линии СВА/Са и крысам линии Вистар максимальной дозы (для данного пути введения) 5000 мг/кг не приводило к гибели животных. Доказано отсутствие токсического воздействия ПБГ Ganoderma lucidum при введении в течение 1, 3 и 6 месяцев на показатели функционального состояния печени, почек, липидного обмена, антиоксидантной системы экспериментальных животных. Введение ПБГ Ganoderma lucidum во всех исследуемых дозах приводило к снижению уровня общего холестерола в сыворотке крови через 3 и 6 месяцев, однако эти показатели оставались в пределах физиологических норм для данного вида экспериментальных животных. Определена наиболее эффективная доза ПБГ Ganoderma lucidum – 0,5 мг/кг. Установлено, что применение ПБГ Ganoderma lucidum в дозе 0,5 мг/кг в течение 30 суток приводит к повышению активности факторов как гуморального, так и клеточного иммунного ответа здоровых животных. При применении ПБГ Ganoderma lucidum в дозе 0,5 мг/кг мышам линии СВА/Са возрастает абсолютное количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке в 5,1 раза, относительное количество АОК – в 4,1 раза, а также уровень антител в сыворотке крови (гемолизинов – на 48,94%, гемагглютининов – на 32,86%), что указывает на иммуномодулирующее действие исследуемого ПБГ. Результаты исследования влияния ПБГ Ganoderma lucidum на Т-клеточные реакции здоровых мышей, которые проявляются по типу реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), показали увеличение индекса реакции в 2,4 раза по сравнению с контролем. Установлено, что применение ПБГ Ganoderma lucidum в дозе 0,5 мг/кг на протяжении 30 суток не вызывает патологических изменений в гистологическом строении тимуса и селезенки здоровых мышей СВА/Са, а также в соотношении белой и красной пульп последней. Кроме того, наблюдалось увеличение среднего размера лимфатического островка селезенки по сравнению с контрольной группой. Установлена миграция тимоцитов в периферическую кровь, что может свидетельствовать об активации реакций клеточного иммунитета. Установлено, что лечебное введение ПБГ Ganoderma lucidum в дозе 0,5 мг/кг в течение 10 дней мышам линии СВА/Са с моделированным вторичным иммунодефицитом (вызванным однократным внутрибрюшинним введением циклофосфамида в дозе 150 мг/кг) вызывает восстановление фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов. Количество перитонеальных макрофагов возрастало в 7,4 раза, их фагоцитарная активность увеличивалась в 1,4 раза, фагоцитарный индекс – в 1,2 раза по сравнению с группой позитивного контроля. Применение ПБГ Ganoderma lucidum способствует также восстановлению масовых показателей и клеточности лимфоидных органов, нормализации формулы 20 крови, а также восстанавлению нарушений митоген-стимулированной пролиферативной активности спленоцитов на введение Т- и В- клеточных митогенов, вызванных введением циклофосфамида. Установлено, что введение ПБГ Ganoderma lucidum в дозе 0,5 мг/кг в течение 10 дней мышам линии СВА/Са с экспериментальным вторичным иммунодефицитом способствует восстановлению показателей гуморального и клеточного иммунного ответа: абсолютное и относительное количество АОК в селезенке возрастало в 2,1 раза, титр гемолизинов в сыворотке крови – в 6,7 раза, титр гемагглютининов – в 2,4 раза, индекса реакции ГЗТ – на 37,18% по сравнению с группой позитивного контроля. Таким образом, экспериментально обоснована целесообразность применения ПБГ Ganoderma lucidum в качестве иммуномодулирующего средства. Розработан перспективный фармакологический агент для подальших исследований – порошок біомаси гриба Ganoderma lucidum с целью создания на его основе лечебнопрофилактического средства с иммуномодулирующей активностью.

The thesis is devoted to the investigation of immunomodulatory activity and safety of biomass powder (BP) of fungus Ganoderma lucidum in experimental immunodeficiency. It was found that the biomass of the fungus Ganoderma lucidum (strain 1900), obtained by cultivation on glucose-peptone culture medium supplemented with yeast extract, under the single intragastric administration belongs to the toxicity class IV – substances of low toxicity. There were no toxic effects of BP of fungus Ganoderma lucidum when administered for 1, 3 and 6 months on functional state of the liver, kidneys, as well as on lipid metabolism, and antioxidant system of experimental animals. It was found that the use of BP of the fungus Ganoderma lucidum for 30 days leads to the increase of the activity both humoral and cellular immune responses in intact animals. It was established that oral administration of BP for 10 days to mice CBA / Ca with simulated secondary immunodeficiency (due to the introduction of cyclophosphamide) results in the restoration of phagocytic activity of peritoneal macrophages. Application BP of fungus Ganoderma lucidum also promote the restoration of humoral and cellular immunity, has a normalizing effect on weight indices and cellularity of lymphoid organs from animals with simulated secondary immunodeficiency.