Analysis of alfuzosin by HPLC method

Abstract

Мета. Ідентифікація та кількісне визначення альфузозину при використанні ВЕРХ в уніфікованих умовах, придатних для дослідження фармацевтичних препаратів і біологічних об'єктів. Висновки. Ідентифікацію альфузозину проводили з використанням абсолютних параметрів часу утримування (tR = 15,51 ± 0,02 хв) і об’єму утримування (VR = 1551,1 ± 0,2 мкл). Для перевірки вибору умов хроматографії визначено коефіцієнти симетрії піків і коефіцієнти ємності. Встановлено, що значення коефіцієнтів симетрії піків - від 0,96 до 1,06 (менше 2,0) і коефіцієнтів ємності - 9,33 ± 0,03 (більше 0,5) свідчать про придатність системи до хроматографічного аналізу. Для забезпечення надійного виявлення альфузозину використані значення спектрального співвідношення оптичної густини при довжині хвилі - від 220 до 300 нм, які дорівнюють: 0,743; 0,951; 1.921; 2,007; 1,049; 0,269; 0,097. Межа виявлення альфузозину ВЕРХ-методом складала 2,0 мкг / мл або 8,0 нг зразка. Для кількісного визначення альфузозину методом абсолютного калібрування використовувалася калібрувальна крива, побудована в координатах: S, мм2 (площа піку) - C, мкг / мл (концентрація розчину речовини). При застосуванні методу найменших квадратів були розраховані коефіцієнти регресії, відповідні рівнянню S = 3,25 • 10-3 С - 1,5 • 10-3. Встановлено, що лінійність калібрувальної кривої в координатах (S, мм2) - (C, мкг / мл) спостерігається в діапазоні концентрацій 2,0 - 200,0 мкг / мл, що відповідає змісту альфузозину в пробі (4 мкл) від 8,0 до 800,0 нг відповідно. При проведенні ВЕРХ аналізу альфузозину в розчинах проб запропонованим методом відносна невизначеність середніх результатів не перевищувала ± 2,05%. При порівняльній оцінці відтворюваності аналізу альфузозину методом ВЕРХ було встановлено, що значення відносного стандартного відхилення результатів аналізу альфузозину протягом одного дня (всередині дня) і протягом другого дня (між днями) в області низьких (20,0 мкг / мл), середніх ( 100,0 мкг / мл) і високих концентрацій (200,0 мкг / мл) не перевищували 0,86.

Цель. Идентификация и количественное определение альфузозина при использовании ВЭЖХ в унифицированных условиях, пригодных для исследования фармацевтических препаратов и биологических объектов. Выводы. Идентификацию альфузозина проводили с использованием абсолютных параметров времени удерживания (tR = 15,51 ± 0,02 мин) и объема удерживания (VR = 1551,1 ± 0,2 мкл). Для проверки выбора условий хроматографии определены коэффициенты симметрии пиков и коэффициенты емкости. Установлено, что значения коэффициентов симметрии пиков - от 0,96 до 1,06 (менее 2,0) и коэффициентов емкости - 9,33 ± 0,03 (более 0,5) свидетельствуют о пригодности системы хроматографического анализа. Для обеспечения надежного обнаружения альфузозина использованы значения спектрального соотношения оптической плотности при длинах волн - от 220 до 300 нм, которые равны: 0,743; 0,951; 1.921; 2,007; 1,049; 0,269; 0,097. Предел обнаружения альфузозина ВЭЖХ-методом составил 2,0 мкг / мл или 8,0 нг образца. Для количественного определения альфузозина методом абсолютной калибровки использовалась калибровочная кривая, построенная в координатах: S, мм2 (площадь пика) - C, мкг / мл (концентрация раствора вещества). При применении метода наименьших квадратов были рассчитаны коэффициенты регрессии, соответствующие уравнению S = 3,25 • 10-3 С - 1,5 • 10-3. Установлено, что линейность калибровочной кривой в координатах (S, мм2) - (C, мкг / мл) наблюдается в диапазоне концентраций 2,0 - 200,0 мкг / мл, что соответствует содержанию альфузозина в пробе (4 мкл) от 8,0 до 800,0 нг соответственно. При проведении ВЭЖХ анализа альфузозина в растворах проб предлагаемым методом относительная неопределенность средних результатов не превышала ± 2,05%. При сравнительной оценке воспроизводимости анализа альфузозина методом ВЭЖХ было установлено, что значения относительного стандартного отклонения результатов анализа альфузозина в течение одного дня (внутри дня) и в течение второго дня (между днями) в область низких (20,0 мкг / мл), средних (100,0 мкг / мл) и высоких концентраций (200,0 мкг / мл) не превышали 0,86.

Aim. The identification and quantification of alfuzosin, when using unified conditions HPLC, suitable for studies of pharmaceuticals and biological objects. Conclusions. The identification of alfuzosin conducted with using absolute parameters of retention time (tR = 15.51 ± 0.02 min) and retention volume (VR = 1551.1 ± 0.2 μl). To verify the choice chromatography conditions determined coefficients of peak symmetry and coefficients of capacity. Established that the values of coefficients peak symmetry - from 0.96 to 1.06 (less than 2.0) and the coefficients of capacity – 9.33 ± 0.03 (more than 0.5) showed the suitability of HPLC chromatographic analysis system. To ensure reliable detection of alfuzosin used spectral ratio values absorbance at wavelengths - from 220 to 300 nm, which are equal: 0.743; 0.951; 1.921; 2.007; 1.049; 0.269; 0.097. The detection limit of alfuzosin HPLC method was 2.0 µg / ml or 8.0 ng of sample. For quantitative HPLC determination of alfuzosin by absolute calibration method was used the calibration curve constructed in the coordinates: S, mm2 (peak area) – C, μg / ml (concentration of solution of the substance). In applying the method of least squares regression coefficients were calculated corresponding equation S = 3,25·10-3 С - 1,5·10-3. Established that the linearity of the calibration curve in coordinates (S, mm2) - (C, µg / ml) was observed in the concentration range 2,0 – 200,0 µg / ml, which corresponds to alfuzosin content in the sample (4 μl) of 8,0 ng to 800,0 ng respectively. In conducting HPLC analysis of alfuzosin in sample solutions using the proposed method relative uncertainty of the average results did not exceed ± 2,05 %. In a comparative assessment of the reproducibility of alfuzosin analysis by HPLC, it was found that the values of the relative standard deviation of the results of alfuzosin analysis during one day (intra-day) and during the second day (inter-day) in the region of low (20,0 μg / ml), medium (100,0 μg / ml) and high concentrations (200,0 μg / ml) did not exceed 0,86.