Розробка методик стандартизації приймочок Крокуса посівного (шафран) для включення у проект монографії Державної Фармакопеї України

Abstract

Крокус посівний (Crocus sativus L.) з родини Ірисові (Iridaceae) – лікарська та харчова рослина, яку нещодавно почали активно культивувати в Україні. Спеція «шафран» – це є приймочки з квітки крокусу, які проявляють широкий спектр фармакологічної активності завдяки своїм трьом основним біоактивним сполукам: кроцину, пікрокроцину та шафраналю. Якість цієї сировини регламентується різними норматив-ними документами, проте в Державній фармакопеї України (ДФУ) така стаття відсутня.Мета. Провести порівняльний аналіз монографії «Saffron for homoeopatic preparations» з European Pharmacopoeia (ЄФ) 9.0, «Safran. Croci stigma» з Deutscher arzneimittel codex (DAC) та «Spices – Saffron (Crocus sativus L.)» з ISO 3632 за показниками: опис, ідентифікація (мікроскопія та ТШХ), сторонні доміш-ки, втрата в масі під час висушування, зола та кількісне визначення кроцину, пікрокроцину та шафраналю методом УФ-Вид-спектрофотометрії для з’ясування можливості гармонізації вимог національної законо-давчої бази на приймочки крокусу з ЄФ, DAC та ISO. Результати аналізу будуть враховані для розробки монографії національної частини ДФУ «Крокусу посівного (шафран) приймочки».Результати та їх обговорення. Проаналізовано показники якості приймочок крокусу та їх нормування, що визначено монографією ЄФ 9.0, DAC та ISO 3632 на досліджувану сировину, виявлено певні відмінності щодо регламентованих показників якості сировини. Результати власних досліджень засвідчили, що зразки приймочок українського крокусу (шафран) відповідають усім зазначеним вимогам. Наведено результати макро- та мікроскопічного дослідження сировини; хроматографічне дослідження проведено відповідно до ЄФ 9.0 та DAC із використанням кроцину як стандартної речовини; кількісне визначення кроцину, пікро-кроцину та шафраналю у 8 зразках приймочок крокусу проведено методом УФ-Вид-спектрофотометрії відповідно до ISO 3632. Запропоновано ввести такі значення питомого показника поглинання: для кро-цину (C44H64O24; М.м. 976,70) – не менше 180, для шафраналю (C10H14O; М.м. 150,22) – не менше 30, для пікрокроцину (C16H26O7; М.м. 330,37) – не менше 60, у перерахунку на суху сировину.Експериментальна частина. Для аналізу використовували висушені приймочки крокусу посівного (шафран), заготовлені у смт Любимівка, Херсонська обл., Україна (2016 – 2018), а також комерційні зразки шафрану з Марокко, Азербайджану, Іспанії. Проведено аналіз провідних НТД, що містять статті «Крокусу приймочки», серед них ЄФ 9.0, DAC та ISO 3632. Проводили дослідження: опис зовнішнього вигляду цілих приймочок крокусу; втрата в масі під час висушування та масова частка летких сполук (105 °С, 16 год); масова частка загальної золи; вимірювання кількості пікрокроцину, шафраналю та кроцину проводили шляхом прямого зчитування поглинання 1 % водного розчину приймочок за 257 нм, 330 нм та 440 нм, від-повідно, за допомогою УФ-Вид-спектрофотометра.Висновки. Проведено аналіз вимог до якості ЛРС – приймочкок крокусу посівного за двома моногра-фіями: ЄФ 9.0 «Saffron for homoeopatic preparations», «Safran. Croci stigma» з Deutscher arzneimittel codex та міжнародним стандартом якості ISO 3632 «Spices – Saffron (Crocus sativus L.)». Визначено основні критерії стандартизації приймочок крокусу. Запропоновано внести монографію до національної частини ДФУ «Крокусу посівного приймочки (шафран)» за такими вимогами: ідентифікація (макро- та мікроскопічні ознаки; тонкошарова хроматографія (кроцин); кількісне визначення (вміст кроцину, пікрокроцину, шафра-налю), адаптоване до ISO 3632, яке проводиться методом УФ-Вид-спектрофотометрії; сторонні домішки; втрата в масі під час висушування; загальна зола.

Crocus sativus L. from the Iridaceae family is a medicinal and edible plant that has recently been actively cul - tivated in Ukraine. Saffron spice is crocus flower stigmas exhibiting a wide range of the pharmacological activity due to its three main bioactive compounds: crocin, picrocrocin and safranal. The quality of this raw material is regulated by various normative documents, but there is no monograph in the State Pharmacopoeia of Ukraine (SPhU). Aim . To perform a comparative analysis of the monograph “Saffron for homoeopatic preparations” from the Ph. Eur. 9.0, “Saffron. Croci stigma” from the Deutscher arzneimittel codex (DAC) and “Spices – Saffron ( Crocus sativus L.)” from the ISO 3632 by the following indicators: description, identification (microscopy and TLC), impu - rities, loss on drying, total ash and quantification of crocin, picrocrocin and safranal by UV-Vis-spectrophotometry to clarify the possibility of harmonizing the requirements of the national legal framework for Crocus stigmas with the Ph. Eur. 9.0, DAC and ISO 3632. The results of the analysis will be taken into account in the development of the monograph of the national part of the SPhU “ Crocus stigmas (saffron)”. Results and discussion. The quality indicators of Crocus stigmas and their standardization determined by the monograph in the Ph. Eur. 9.0, DAC and ISO 3632 on the raw material studied have been analyzed; some differences in the regulated quality indicators of the raw material have been found. The results of our own research have shown that the samples of the Ukrainian Crocus (saffron) meet all these requirements. The results of the macro- and microscopic examination of the raw material are given. The chromatographic examination has been performed in accordance with the Ph. Eur. 9.0 and DAC using crocin as a standard compound; the quan - titative determination of crocin, picrocrocin and safranal in 8 samples of Crocus stigmas has been performed by UV-Vis-spectrophotometry in accordance with the ISO 3632. It has been proposed to introduce the following indicators to determine the specific absorption rate: for crocin (C 44 H 64 O 24 ; Mw – 976.70) not less than 180, for safranal (C 10 H 14 O; Mw – 150.22) – not less than 30, for picrocrocin (C 16 H 26 O 7 ; Mw – 330.37) – not less than 60 calculated with reference to the dried raw material. Experimental part. For analysis the dried stigmas of Crocus sativus (saffron) collected in the village Lyubimivka, Kherson region, Ukraine (2016-2018), as well as commercial samples of saffron from Morocco, Azerbaijan, Spain were used. The analysis of the leading normative documents containing monographs “ Crocus stigmas”, among them the Eur. Ph. 9.0, DAC and ISO 3632, was performed. The studies included description of the appearance of the whole Crocus stigmas; loss on drying and the mass fraction of volatile compounds (105 °C, 16 h); the mass fraction of total ash. The amount of picrocrocin, safranal and crocin was measured by direct reading of the absorption of 1 % aqueous solution of stigmas at 257 nm, 330 nm and 440 nm, respectively, using a UV-Vis-spectrophotometer. Conclusions . The analysis of the requirements to quality of the medicinal raw material – stigmas of Crocus sativus – has been performed based on the monographs: “Saffron for homoeopatic preparations” from the Ph. Eur. 9.0, “Saffron. Croci stigma” from the Deutscher arzneimittel codex and “Spices – Saffron ( Crocus sativus L.)” from the ISO 3632. The main criteria for standardization of the raw material have been determined. It has been proposed to intro - duce the monograph to the national part of the SPhU “ Crocus stigmas (saffron)” according to the following requirements: identification (macro- and microscopic signs; thin-layer chromatography (crocin); the quantitative determination (the content of crocin, picrocrocin and safranal) adapted to the ISO 3632, performed by UV-Vis- spectrophotometry; impurities; loss on drying; total ash.