Research of validation parameters of the spectrophotometric quantitative determination method of riboflavin by specific absorbance

Abstract

The study of validation parameters of the quantitative determination method of riboflavin by specific absorbance and their assessment have been conducted in order to standardize procedures for analysis by the specific absorbance and the stage-by-stage control of correctness of the results obtained during the validation experiment. According to the requirements of the State Pharmacopoeia of Ukraine (SPhU) the qualification of the spectrophotometer has been performed. The control of the cells (δdif ≤ 0.002), absorbance accuracy, absorbance convergence with removing the cells (RSD0 0.0007% ≤ 0.25%), as well as the study of the limit of stray light (absorbance of the solution at the wavelength of 198 nm is 2.56 ≥ 2.0, which meets the requirements of SphU) have been carried out. Characteristics and acceptance criteria of the assay method for riboflavin such as the nominal concentration of the substance in solution by the method, the nominal absorbance and requirements for its minimum value, the maximum uncertainty of the analysis procedure have been theoretically calculated. The linearity parameter has been studied at 9 points. The linear dependence plot has been constructed in the normalized coordinates. The values of b, sb, a, sa, RSD0 and r calculated comply with the requirements to parameters of the linear dependence. When studying the parameter of accuracy the systematic error is δ = 0.72%, which meets δ ≤ 1.00%. According to the results of the convergence study the relative confidence interval ΔAs = 0.83% does not exceed the critical value for convergence of the results ΔAs = 0.96%. The validation parameters of the method meet the requirements of the SPhU and are characterized by qualitative analytical indicators.

З метою стандартизації процедури проведення аналізу методом показника поглинання та поетапного контролю коректності отриманих результатів протягом експерименту прове- дено вивчення валідаційних параметрів методики кількісного визначення рибофлавіну мето- дом показника поглинання та зроблена їх оцінка. Відповідно до вимог Державної фармакопеї України (ДФУ) проведено кваліфікацію спектрофотометра. Здійснено контроль стану кювет (δdif ≤ 0.002), контроль правильності оптичної густини, перевірку збіжності оптичної густи- ни з вийманням кювет (RSD0 0,0007% ≤ 0,25%), контроль граничного рівня розсіяного світла (оптична густина розчину при довжині хвилі 198 нм склала 2,56 ≥ 2,0), що відповідає вимогам ДФУ. Теоретично розраховані характеристики і критерії прийнятності методики кількісного визначення рибофлавіну: номінальна концентрація речовини у розчині за методикою, номі- нальна оптична густина та вимоги до її мінімального значення, максимальна невизначеність методики аналізу. Вивчено параметр лінійності на 9 точках. Побудовано графік лінійної за- лежності у нормалізованих координатах. Розраховані величини b, sb, a, sa, RSD0 та r відповіда- ють вимогам до параметрів лінійної залежності. При дослідженні параметра правильності систематична похибка склала δ = 0,72%, що відповідає вимогам δ ≤ 1,00%. За результатами дослідження збіжності відносний довірчий інтервал Δas = 0,83% не перевищує критичне зна- чення для збіжності результатів Δas = 0,96%. Валідаційні параметри методики відповідають критеріям прийнятності ДФУ та характеризуються якісними аналітичними показниками.

С целью стандартизации процедуры проведения анализа методом показателя поглощения и поэтапного контроля корректности полученных результатов во время эксперимента про- ведено изучение валидационных параметров методики количественного определения рибо- флавина методом показателя поглощения и дана их оценка. Согласно требованиям Государст- венной фармакопеи Украины (ГФУ) проведено квалификацию спектрофотометра. Осуществлен контроль состояния кювет (δdif ≤ 0.002), контроль правильности оптической плотности, проверку сходимости оптической плотности с извлечением кювет (RSD0 0,0007%≤0,25%), проведены исследования предельного уровня рассеянного света – оптическая плотность резко увеличивалась при длине волны между 220 нм и 200 нм и составила 2,559 при длине волны 198 нм, что соответствует требованиям ГФУ. Теоретически рассчитаны характе- ристики и критерии приемлемости методики количественного определения рибофлавина: номинальная концентрация вещества в растворе по методике, номинальная оптическая плотность и требования к ее минимальному значению, максимальная неопределенность методики анализа. Изучены параметр линейности на 9 точках. Построен график линейной зависимости в нормализованных координатах. Рассчитанные величины b, sb, a, sa, RSD0 и r соответствуют требованиям к параметрам линейной зависимости. При исследовании па- раметра правильности систематическая погрешность составила δ = 0,72%, что соответ- ствует требованиям δ≤1,00%. По результатам исследования сходимости относительный доверительный интервал ΔАs=0,83% не превышает критическое значение для сходимости результатов ΔАs=0,96%. Валидационные параметры методики соответствуют критериям приемлемости ГФУ и характеризуются качественными аналитическими показателями.