Фармакогностичне дослідження видів роду Galium L. флори України

Abstract

Вперше з використанням нумеричних методів таксономії та програмного забезпечення Excel проведено морфолого- та хемотаксономічне дослідження видів роду Galium L. флори України: встановлено їх ієрархічну підпорядкованість; підтверджено самостійність дискусійних таксонів; визначено 5 перспективних видів та проведено їх комплексне фармакогностичне дослідження. У траві п. справжнього, п. верболистого, п. пухнастоногого, п. карпатського та п. несправжньом’якого визначено вміст амінокислот, карбонових та гідроксикоричних кислот, флавоноїдів; окиснюваних поліфенолів, хлорофілів, каротиноїдів; встановлено компонентний склад ефірних олій, елементний склад сировини; з досліджуваних об’єктів виділено та ідентифіковано 21 речовину. Розроблено технології одержання ліпофільних та фенольних комплексів з трави п. справжнього, п. верболистого і п. пухнастоногого та екстрактів сухих з трави п. справжнього; визначено основні БАР; встановлено антимікробну, протигрибкову та гепатопротекторну активність; визначено гостру та субхронічну токсичності субстанцій. Розроблено проекти МКЯ на підмаренника справжнього траву та екстракти сухі з трави підмаренника справжнього.

На основе нумерических методов таксономии с использованием программного обеспечения Excel впервые проведено морфолого-таксономическое исследование 31 вида рода Galium L. флоры Украины: проанализировано 7533 положительные и отрицательные состояния вегетативных и генеративных признаков; впервые проведено хемотаксономическое исследование 9 видов подмаренников, используя как маркеры фенольные соединения и терпеноиды, проанализировано 1278 положительных и отрицательных состояний химических признаков. На основе рассчитанных коэффициентов парного родства установлены морфолого-таксономические и хемотаксономические расстояния между таксонами, построены иерархические ряды рода по коэффициентам группового родства и доказана самостоятельность нередко отождествляемых видов – G. dasypodum Klokov и G. salicifolium Klokov; G. verum L. и G. ruthenicumWilld.; G. tomentellum Klokov и G. glabratum Klokov. В основе рода находятся виды секции Еugalium DC. – G. suberectum Klokov, G. intermedium Schult., G. carpaticum Klokov, G. pseudomollugo Klokov, G. kernerianum Klokov. Дендрограмма рода Подмаренник в основном соответствует систематической характеристике рода, представленной во Флоре Украины и более поздних монографиях по систематике рода. По результатам морфолого- и хемотаксономического исследования установлены перспективные виды для дальнейшего фармакогностического исследования – это подмаренник настоящий, п. иволистный, п. пушистоногий, п. карпатский и п. ложномягкий, в которых идентифицированы 43 карбоновые кислоты и установлено их содержание; 22 аминокислоты, 9 из которых являются незаменимыми; определено содержание гидроксикоричных кислот, флавоноидов, суммы окисляемых полифенолов и органических кислот. Из травы исследуемых видов методами препаративной бумажной и тонкослойной хроматографии, хромато-масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) выделено и идентифицировано 21 соединение. Впервые из травы п. настоящего, п. иволистного, п. пушистоногого, п. карпатского и п. ложномягкого выделены и идентифицированы апигенин и лютеолин; из травы п. иволистного, п. пушистоногого, п. карпатского и п. ложномягкого – умбеллиферон; из травы п. настоящего, п. иволистного – кемпферол; из травы п. настоящего, п. пушистоногого и п. ложномягкого – кверцетин; из травы п. ложномягкого – скополетин. Из травы п. настоящего впервые выделены и идентифицированы кислота неохлорогеновая, изокверцитрин, из травы п. иволистного – кофейная и неохлорогеновая кислоты, кверцитрин и изокверцитрин, из травы п. пушистоногого – феруловая и неохлорогеновая кислоты, кверцитрин, изокверцитрин; из травы п. карпатского – кислота феруловая, кверцитрин, изокверцитрин, рутин, из травы п. ложномягкого – кислоты кофейная и феруловая, кверцитрин; из травы п. настоящего, п. иволистного, п. пушистоногого и п. карпатского – кислоты бензойная, фенилуксусная и ванилиновая; из травы п. иволистного, п. пушистоногого и п. карпатского – кислота салициловая. Методом ВЭЖХ в траве п. настоящего впервые идентифицированы и установлено содержание апигенина (64,9 мг/100г), лютеолин-7-О-диглюкозида (19,9 мг/100г), лютеолина (50,1 мг/100г); в траве п. карпатского – лютеолина (91,0 мг/100г), цинарозида (157,8 мг/100г) и лютеолин-7-O-галактозида (6,9 мг/100). Определены основные морфолого-анатомические признаки травы п. настоящего, п. иволистного, п. пушистоногого, п. карпатского и п. ложномягкого. Разработаны технологии получения липофильных «Галофиллин», «Вербенол», «Галиканд» и фенольных комплексов – «Галиверин», «Феносалицин» и «А-фунг» из травы подмаренника настоящего, п. иволистного и п. пушистоногого, а также сухих экстрактов травы подмаренника настоящего. Исследованы биологически активные вещества липофильных и фенольных комплексов; экстрактов сухих травы подмаренника настоящего («ВСС-Т» и «ОПК-Т»). Установлена антимикробная и противогрибковая активность липофильных и фенольных комплексов в отношении S. aureus, E. coli, P. vulgaris, P. aeruginosa, B. subtilis, десяти видов грибов рода Сandida и семи тест-штаммов грибов, не относящихся к роду Сandida; определены корреляционные взаимосвязи между содержанием основных БАВ и уровнем антимикробной и противогрибковой активности комплексов. Исследована гепатопротекторная активность экстрактов сухих травы подмаренника настоящего. Установлено, что экстракт «ОПК-Т» практически не уступает по степени гепатопротекторной активности референс-препарату «Силибор». Липофильные и фенольные комплексы по классификации К. К. Сидорова относятся к VI классу токсичности – относительно безвредные вещества; характеризуются отсутствием субхронической токсичности; экстракты «ВСС-Т» и «ОПК-Т» отнесены к V классу токсичности – практически нетоксические вещества. Разработаны проекты фармакопейных статей на подмаренника настоящего траву и экстракты сухие из травы подмаренника настоящего.

Morphological and chemotaxonomic studies of Galium L. genus species of Ukrainian flora using numeric taxonomy methods and software Excel have been carried out for the first time: hierarchical subordination of the genus have been established; taxonomic independence of identifiable taxa has been confirmed; 5 prospective species for further research have been revealed and their complex pharmacognostic research have been carried out. In herbs of G. verum, G. salicifolium, G. dasypodum, G. carpaticum and G. рseudomollugo amino acids, carboxylic and hydroxycinnamic acids, flavonoids, oxidative polyphenols, chlorophylls and carotenoids have been identified and quantified; elemental composition and essential oils’ compositions have been studied. 21 Compounds have been isolated from these species and identified. Optimal technologies for obtaining lipophilic and phenolic complexes from G. veri, G. salicifolii and G. dasypodi herbs and dry extracts from G. veri herb have been developed; main phytochemicals of these extracts have been studied; antimicrobial, antifungal, hepatoprotective activities, acute and subchronic toxicities of complexes and extracts have been studied. The drafts of quality-control technology on Galii veri herb and dry extracts from Galii veri herb have been developed.