Модификация и валидация УФ-спектрофотометрической методики количественного определения доксиламина в крови: специфичность/селективность

Abstract

Роботу присвячено апробацiї запропонованих ранiше авторами пiдходiв до визначення специфiчностi/селективностi пiд час проведення валiдацiї УФ-спектрофотометричних методик кiлькiсного визначення в судово-токсикологiчному аналiзi на прикладi кiлькiсного визначення доксиламiну в кровi. Для проведення валiдацiї застосовували нормалiзованi координати; аналiтичний дiапазон методики складав 25-175%. Результатом роботи стала розробка оптимального поетапного алгоритму пiдтвердження специфiчностi/селективностi УФ-спектрофотометричних методик кiлькiсного визначення аналiтiв в бiологiчних рiдинах. Для характеристики вiдтворюваностi значень оптичної густини запропоновано використовувати вiдносне стандартне вiдхилення у вiдсотках до певного номiнального значення (0,1 або Аblank/0,32) оптичної густини snom,r. Запропоновано критерiй прийнятностi вiдтворюваностi значень Аblank — snom,r повинне бути незначущим у порiвняннi з max As. Оптимальна кiлькiсть blank-проб для отримання надiйного середнього значення Аblank складає 5. УФ-спектрофотометричну методику кiлькiсного визначення доксиламiну в кровi без попередньої ТШХ-очистки за рахунок впливу компонентiв blank-проби обтяжено значущою систематичною похибкою; для методики з попередньою ТШХ-очисткою blank незначуща в порiвняннi з max As. При цьому для обох випадкiв procedure є незначущою в порiвняннi з blank, що свiдчить про адекватнiсть запропонованої процедури пробопiдготовки.

The paper is devoted to testing the approaches to determination of specificity/selectivity when carrying out the validation of UV-spectrophotometric methods of quantitative determination in forensic and toxicological analysis offered by authors previously by the example of doxylamine quantitative determination in blood. The normalized coordinates have been applied for carrying out the validation; the analytical range of the method is 25-175%. The result of the investigations is the development of the optimal step-by-step algorithm of confirmation of specificity/selectivity of UV-spectrophotometric methods of analytes quantitative determination in biological fluids. To describe the reproducibility of absorbance values, relative standard deviation in percents to certain nominal value (0,1 or Аblank/0,32) of absorbance snom,r has been suggested for application. The acceptability criterion for reproducibility of Аblank values has been offered — snom,r should be insignificant against max As. The optimal quantity of blank-samples for obtaining the valid mean value of Аblank is 5. UV-spectrophotometric method of doxylamine quantitative determination in blood without preliminary TLC-purification is burdened with significant systematic error due to influence of components of blank-sample; for method with preliminary TLC-purification blank is insignificant against max As. In the same time, for both cases procedure is insignificant against blank that is the evidence of adequacy of the offered procedure of sample preparation.