Selection of “Green” Conditions for Identifying Components in a Combined Medicine by TLC/HPTLC Methods

Abstract

Aim. To select “green conditions” for identifying components in a combined medicine for the treatment of alcohol intoxication. Materials and methods. Thin-layer chromatography and high-performance thin-layer chromatography methods were used. An analytical GREEnness calculator was applied to assess the environmental friendliness of the analytical procedure. Results and discussion. The choice of mobile and stationary phases that comply with the principles of “green chemistry” and can be used to detect glutamic acid and glycine in the composition of a combined medicine has been substantiated. It has been determined that by the indicators Rf, Rs, ΔRf, α, N, H the most effective for the division is the ethanol (96 %) – water (70:30) mobile phase (the length of the solvent front is 10 cm, the application volume is 5 μL), which allows, in addition to amino acids, to determine another prescription component – ascorbic acid. The conditions for identification of substances by the high-performance thin-layer chromatography method (the length of the solvent front is 7 cm, the application volume is 2 μL) have been selected. It has been found that to detect chromatographic zones, it is optimal to use ninhydrin solution R1 with further heating of the plate at a temperature of 100 – 105 °С for 5 min. The specificity of determination of glutamic acid, glycine and ascorbic acid in comparison with solutions of standard substances has been proven. While studying the robustness of the method the influence of chromatographic conditions on the final result (influence of plate materials of different manufacturers, chamber saturation, application volume, distance from the “start line” to “finish line”, influence of the detection solution, the stability of analyte in solution and on the plate) has been researched. The precision of the method on one and three plates of the same type has been studied; the intermediate precision has been researched. The calculated assessment of greenness of the analytical procedure is 0.66. Conclusions. As a result of the studies conducted, “green conditions” for identifying amino acids (glutamic acid, glycine), as well as ascorbic acid in a combined medicine by thin-layer chromatography and high-performance thin-layer chromatography methods have been selected. The validation characteristics of the method (specificity, robustness and precision) have been studied.

Добрати «зелені» умови для ідентифікації компонентів у складі комбінованого лікарського засобу, призначеного для лікування алкогольної інтоксикації. Матеріали та методи. Під час дослідження використано методи тонкошарової та високоефективної тонкошарової хроматографії. Для оцінювання екологічності аналітичної методики було застосовано аналітичний калькулятор «GREEnness». Результати та їх обговорення. Обґрунтовано вибір рухомих фаз, які відповідають принципам «зеленої хімії» та можуть бути використані для виявлення глутамінової кислоти та гліцину у складі комбінованого лікарського засобу. Визначено, що за показниками Rf, Rs, ΔRf, α, N, H найефективнішою для розділення є рухома фаза етанол (96 %) – вода (70:30) (довжина фронту розчинника – 10 см, об’єм для нанесення – 5 мкл), яка дозволяє, окрім амінокислот, також визначити ще один компонент пропису – кислоту аскорбінову. Дібрано умови для визначення речовин методом високоефективної тонкошарової хроматографії (довжина фронту розчинника – 7 см, об’єм для нанесення – 2 мкл). З’ясовано, що для виявлення хроматографічних зон оптимальним є використання нінгідрину розчину Р1 із подальшим нагріванням пластини за температури 100 – 105 °С протягом 5 хвилин. Доведено специфічність визначення глутамінової кислоти, гліцину та аскорбінової кислоти проти розчинів стандартних речовин. Під час вивчення робасності методики досліджено вплив умов проведення хроматографування на кінцевий результат (тип нерухомої фази, насиченість камери, об’єм нанесення, відстань від лінії старту до фінішу, розчин для виявлення, стабільність розчинів для нанесення). Вивчено прецизійність методики на одній та на 3-х пластинах одного типу, досліджено внутрішньолабораторну прецизійність. Розрахункова оцінка «зеленості» аналітичної методики становить 0,66. Висновки. У результаті проведених досліджень було дібрано «зелені» умови для ідентифікації амінокислот (глутамінової кислоти, гліцину) та аскорбінової кислоти в комбінованому лікарському засобі методами тонкошарової і високоефективної тонкошарової хроматографії, а також вивчено валідаційні характеристики методики (специфічність, робасність та прецизійність).