Наукове та експериментальне обґрунтування складу та технології ін’єкційного розчину вакцини «Кандидоцид» для попередження та лікування кандидозу

Abstract

Дисертація присвячена науковому та експериментальному обґрунтуван-ню складу і технології ін’єкційного розчину вакцини для попередження та ліку-вання кандидозу. Запропоновано загальну методологічну концепцію фармацевтичної роз-робки ІРВ для ПЛК. Розроблено загальну фармакопейну статтю «Термінологія, яку викорис-товують у монографіях на імунобіологічні лікарські засоби» (5.2.1) розділу 5.2 «Загальні тексти на біологічні лікарські засоби», яка запланована до внесення у ДФУ 2.0 Доповнення 3. За результатами фізико-хімічних та біологічних досліджень обґрунтовано технологію дезінтеграції клітин грибів C. albicans та С. tropicalis, яка полягає в обробці біомаси ультразвуком на апараті УЗУУ-21 при частоті 22 кГц, інтенси-вності 5 Вт/см2 і температурі (25 ± 2) °С упродовж 15 хв. Також обґрунтовано технологію очищення антигенного матеріалу від супутніх низькомолекулярних баластних речовин, яка полягає у проведенні ультрафільтрації з використанням фільтра «MF-Millipore» із розміром пор 0,05 мкм, який забезпечує відділення білків, полісахаридів грибів C. albicans та С. tropicalis з молекулярною масою менше 10 кДа. Для практичної медицини і фармації створено ІРВ для ПТК. Обґрунтова-но та експериментально розроблено промислову технологію виробництва ІРВ «Кандидоцид» для ПЛК. Складено технологічну й апаратурну схеми виробниц-тва. Експериментально встановлено тип упаковки, умови і термін зберігання розробленого ІРВ на онові грибів C. albicans and C. tropicalis. Розроблено методи ідентифікації та кількісного визначення вмісту речовин в ІРВ, досліджено основ-ні показники якості, розроблено проект МКЯ. Узагальнено дані імунологічних та біологічних досліджень запропонованого ІРВ.

Диссертация посвящена научному и экспериментальному обоснованию состава и технологии инъекционного раствора вакцины для предупреждения и лечения кандидоза. Предложена общая методологическая концепция фармацевтической раз-работки ИРВ для ПЛК. Разработана общая фармакопейная статья «Терминология, используемая в монографиях на иммунобиологические лекарственные средства» (5.2.1) раз дела 5.2 «Общие тексты на биологические лекарственные средства», которая запланирована к включению в ГФУ 2.0 Дополнение 3. На основании физико-химических, иммунологических и биологических исследований впервые разработаны рациональный состав и технология ИРВ под условным названием «Кандидоцид» для ПЛК. Согласно результатам физи-ко-химических и биологических исследований обоснована технология дезинте-грации клеток грибов C. albicans и С. tropicalis, которая заключается в обработ-ке биомассы ультразвуком на аппарате УЗУУ-21 с частотой 22 кГц, интенсив-ностью 5 Вт/см2, при температуре (25 ± 2) ° С в течение 15 мин. Также обосно-вана технология очистки антигенного материала от сопутствующих низкомоле-кулярных балластных веществ, которая заключается в проведении ульт-рафильтрации с использованием фильтра «MF-Millipore» с размером пор 0,05 мкм, который обеспечивает отделение антигенного материала с молеку-лярной массой меньше 10 кДа. На основании комплекса иммунобиологических, физико-химических и биологических исследований обоснован состав ИРВ: белки и полисахариды грибов C. albicans и C. tropicalis (концентрация белка – 4 мг/мл, полисахаридов – 17 мг/мл), растворитель (фосфатно-буферный раствор рН 7,2 ± 0,2) и вспомога-тельное вещество (консервант фенол в количестве 0,25%). Экспериментально установлены тип упаковки, условия и срок хранения разработанного ИРВ «Кандидоцид», при которых он сохраняет стабильность. Разработан проект технологического промышленного регламента на про-изводство ИРВ под условным названием «Кандидоцид» и проведена его апроба-ция в условиях промышленного производства ООО МНПЦ «Биосан» – произ-водство ИРВ внесено в перспективный план развития на 2020 г., ПАТ «Фармс-тандарт-Биолек» – производство ИРВ внесен в перспективный план развития на 2020–2021 гг., ТОВ «Фонд «Здоровье нации» – производство ИРВ внесено в перспективный план развития на 2020–2021 гг.

The thesis is devoted to scientific and experimental substantiation of the com-position and technology of the vaccine solution for injection (VSI) for prevention and treatment of candidiasis (PTC). The general methodological concept for pharmaceutical development of VSI for PTC has been proposed. The general monograph “Terminology used in monographs on immunobiolog-ical drugs” (5.2.1.) of section 5.2 “General texts on biological medicinal products” planned to be included into the SPhU 2.0, Appendix 3, has been developed. For the first time based on the physicochemical, immunological and biological studies the rational composition and technology of VSI under the conditional name of “Candidocyde” for PTC have been developed. According to the results of the physi-cochemical and biological studies the technology of cell disintegration of C. albicans and С. tropicalis fungi has been substantiated. It consists in treating the biomass by ultrasound on a UZUU-21 ultrasonic device at the frequency of 22 kHz, intensity of 5 W/cm2 and temperature of (25 ± 2) °С for 15 min. The technology for purification of the antigenic material from the related low-molecular ballast substances has been also substantiated. It consists in ultrafiltration using a “MF-Millipore” filter with the particle size of 0.05 μm, it provides separation of the antigenic material with the mo-lecular weight less than 10 kDa. According to the results of the microbiological, physicochemical and immuno-biological studies the composition of VSI has been substantiated: proteins and poly-saccharides of C. albicans and C. tropicalis fungi (the protein concentration – 4 mg/ml, the polysaccharide concentration – 17 mg/ml), the solvent (phosphate buffer solution with рН of 7.2 ± 0.2) and the excipient (phenol as a preservative in the amount of 0.25 %). The manufacturing technology for “Candidocyde” VSI for PTC has been sub-stantiated and experimentally developed. The manufacturing formula and technologi-cal flowchart has been worked out. The novelty of the research is protected by the pa-tents of Ukraine No. 94138 and 94139. Two information letters No. 119-2015 “The immunobiological drug for pre-vention and treatment of candidal infection” and No. 214-2015 “The method of ob-taining the solution of the immunobiological drug for prevention and treatment of candidal infection” have been prepared and approved by the Ukrainian Center of Sci-entific Medical Information and Patent and Licensing Work at the Ministry of Health of Ukraine. The pack type, shelf life and storage conditions of “Candidocyde” VSI, in which it is stable, have been experimentally determined. Using modern research methods the methods for qualitative and quantitative determination of active substances and excipients in the composition of VSI have been proposed. The basic indicators of quality of the vaccine proposed have been studied; the project of the Quality Control Methods (QCM) has been elaborated. The immunological and biological studies of “Candidocyde” VSI developed allow offering it as an effective and safe vaccine for PTC. The theoretical basis of the thesis is methodological recommendations “Meth-ods for disintegration of microorganisms and further purification to obtain antigens”, “Methods for inactivation of microorganisms and subsequent mixing to obtain anti-gens” and “Components of vaccines and methods for their substantiation”; a monograph “General characteristics of vaccines and the manufacturing technology (on the example of VSI development for PTC)”. The project of the manufacturing specification for VSI under the conditional name of “Candidocyde” has been developed at LLC “Medical Research and Produc-tion Center Biosan” – production of VSI included in the long-term development plan for 2020, PJSC “Pharmstandard-Biolik” – production of VSI included in the long-term development plan for 2020–2021, LLC “Health of the Nation Fund” – produc-tion of VSI included in the long-term development plan for 2020–2021. The results of the dissertation research are introduced into the educational pro-cess of a number of higher pharmaceutical and medical educational institutions of Ukraine.